우수한 세포 형질 감염 성능: 세포 형질 감염 양성률이 90% 이상이며, 유전자 녹아웃 효과가 뚜렷하고, A549 세포층 유착단백질 A/C 유전자 녹아웃 효율이 95% 이상이다.
세포 독성이 매우 낮다: 형질 감염된 세포 사망률 (10% 미만) 은 세포 독성이 실험 결과에 미치는 영향을 크게 감소시킨다.
전염범위가 넓어서 대부분의 벽세포계가 이상적인 형질 감염 결과를 얻을 수 있다.
제품 소개
RFect 소핵산 형질 감염 시약 는 국제 유명 과학자 최쿤원 박사가 이끄는 우리 회사 연구개발팀이 미국 시애틀 연구소에서 성공적으로 개발한 신형 소핵산 형질 감염 시약 이다. RFect 는 200bp 이내의 작은 분자 RNA 와 DNA (예: siRNA, 반의RNA, microRNA 등) 를 전염시키는 데 사용할 수 있습니다. 형질 감염 세포에는 일반 세포계 및 종양 세포계와 같은 대부분의 부착 세포가 포함됩니다. 현재 외국과 국내를 불문하고 시약 전염의 주성분은 지질체나 폴리에틸렌이민 (PEI) 으로, 둘 다 세포 독성이 강해 전염효과가 좋지 않다. RFect 는 새로운 동물원 나노 물질을 채택하여 독성이 낮고 전염성이 뛰어나다. RFect 의 세포 형질 감염 양성율은 일반적으로 다른 브랜드의 작은 핵산 형질 감염 시약 대비 90% 이상이며, 핵섬유층 단백질 A/C 유전자의 억제 효율은 95% 이상이며, 다른 브랜드의 시약 형질 감염 세포 형질 감염 양성률은 일반적으로 70% 미만이며, 핵섬유층 단백질 A/C 유전자의 억제 효율은 75% 미만이다. RFect 의 세포 독성은 매우 낮아 형질 감염 세포 사망률 10% 미만이며, 다른 브랜드의 시약 형질 감염 세포 사망률 (transfect cell) 은 일반적으로 30% 이상이다. 혈청은 형질 감염 효과에 영향을 주지 않으므로 배양기를 의도적으로 추가하거나 교체할 필요가 없다. 우리는 이미 RFect 소핵산으로 시약 전염된 재료 합성과 시약 준비에 국제특허를 출원했고, PCT 를 통해 세계 여러 나라와 지역을 포괄하고 있다. 이 제품은 세포주 형질 감염 및 일차 세포 형질 전환에 적합합니다. RFectPM 작은 핵산 형질 감염 시약 선택 하십시오.
절차: 이 설명서는 24 홀 배양판의 형질 감염 실험에 적용된다. 다른 사양의 배양판 사용량에 대해서는 각 구멍의 사용량과 부피를 보여주는 다음 표를 참조하십시오.
A. 세포접종: 전날에 세포를 접종하고, 구멍당 500 μl 배양기를 감염시킬 때 세포 밀도가 30 ~ 50% 로 항생제를 사용하지 않도록 한다.
B.SiRNA-rfect 혼합물의 제조:
1.6pmol siRNA 는 50μl 무혈청 배양기로 희석되었다.
2.2μl 시약 50μl 무 혈청 배지로 희석되었다. 부드럽게 5 분 동안 실내 온도에서 5 분 동안 부화하십시오. 주의: 반드시 25 분 안에 세 번째 단계를 완성해야지, 너무 오래 끌지 마라.
3. 부화 5 분 후 RFect 희석액 (총 부피 100μl) 으로 시나 희석액을 5 분 동안 부화시킵니다. 부드럽게 섞어서 실온에서 20 분 동안 부화한다.
C. 배양된 세포에 혼합물을 넣는다 (완전 배양기 배양):
1. 100μl 의 혼합물을 0.5ml 배양세포가 포함된 배양구멍에 넣는다. 페트리 접시를 가볍게 흔들어 고르게 섞는다.
2.37 C 배양 18-72h, 유전자 억제 효과 검출. 필요한 경우 세포가 4-6 시간 후에 배양기를 교체할 수 있지만 꼭 필요한 것은 아니다. 부화 시간의 길이는 세포 유형에 따라 다릅니다.
유전자 자체와 분석 방법을 방해하다. 실험에 대해 서로 다른 부화 시간을 설정하여 최적의 부화 시간을 결정할 수 있다.
형질 감염 실험 최적화: 형질 감염 효율을 높이기 위해 형질 감염 조건, 특히 첫 번째 형질 감염 조건을 최적화하는 것이 좋습니다. 예를 들면: 24 홀 페트리 접시, 조정? SiRNA 와 시약 사용량입니다. SiRNA 의 복용량은 0.6-30 pmol (최종 농도 1-50 nm) 사이로 조정되고, RFect 시약 복용량은 1.0-3.0 μ l 사이로 조정되며 고객은 일반적인 복용량에 따라 사전 실험을 할 수 있다. 실험 결과가 만족스럽지 않다면, 감염제의 사용량을 적절히 조정하고 탐구할 수 있다.
형질 감염 실험 포인트:
L 전염시 항생제를 사용하지 마십시오. 그렇지 않으면 세포 사망이 증가할 수 있습니다.
L 1 차 실험에서 siRNA 의 복용량은 10nM, 30nM, 50nM, 100 nM 의 최종 농도로 설정되고 후속 실험은 실험 결과에 따라 수정된다.