다르다. 특수 조직에서 DNA 를 추출할 때, 반드시 문헌과 경험을 참고하여 적절한 추출 방법을 세워야 유용한 DNA 대분자를 얻을 수 있다. 특히 조직의 다당과 효소는 후속 효소와 PCR 반응에 강한 억제 작용을 하기 때문에 이 물질이 풍부한 재료로 게놈 DNA 를 추출할 때 다당과 페놀류를 제거하는 것을 고려해야 한다.
본 실험은 벼 모종을 재료로 게놈 DNA 추출의 일반적인 방법을 배운다.
디옥시리보 핵산
I. 재료
벼 모종
둘째, 설비는
이동관, 냉동고속원심분리기, 데스크탑 고속원심분리기, 수욕냄비, 도자기 발우, 50ml 편심관 (덮개 있음), 5ml 및 1.5ml 원심관, 갈고리로 구부러진 작은 유리봉.
셋째, 시약
1, 추출 버퍼? : 100mmol/L Tris? 염소, pH8.0, 20 밀리몰/리터 EDTA, 500 밀리몰/리터
염화나트륨, 1.5% 도데 실 황산나트륨.
2. 버퍼 추출? : 18.6g 포도당, 6.9g 디 에틸 디설파이드 탄산나트륨, 6.0gPVP, 240ul 메르 캅토 에탄올, 300ml 까지 물을 넣는다.
3,80: 4:16/클로로포름: 펜틸알코올: 에탄올
리보 핵산 모액: 제형은 제 1 장을 참조하십시오.
5. 기타 시약: 액체 질소, 이소프로판올, TE 완충액, 무수에탄올, 70% 에탄올, 3mol/L NaAc.
넷째, 절차:
(1) 벼 모종이나 다른 화본과 식물에서 게놈 DNA 를 추출한다.
1. 50 밀리리터의 원심관에 20 밀리리터의 추출 완충액을 넣다. , 60? 수조가 예열되다.
2. 벼 모종 또는 잎 5- 10g, 조각을 썰어 연발우에 액체 질소를 넣어 가루로 갈아서 즉시 연발에서 예열한다.
원심관에서 힘껏 흔들어 고르게 섞는다, 60? 수욕은 30-60 분 (시간이 길고 DNA 수율이 높음) 동안 보온하며 수시로 흔들린다.
3. 20ml 염소 모조/펜틸알코올/에탄올 용액을 넣고 거꾸로 섞는다 (장갑을 끼고 피부 손상을 방지해야 함), 실온에서 5- 10 분 동안 가만히 두어 수상과 유기를 분리한다 (필요한 경우 다시 섞는다).
4. 실온에서 5000rpm 속도로 5 분간 원심합니다.
5. 상청액을 다른 50ml 원심관으로 조심스럽게 옮기고 1 배 부피의 이소프로판올을 넣고 섞어서 실온에 일정 기간 방치해 솜모양의 DNA 침전을 일으킨다.
6. 1 ml TE 를1.5ml eppendorf 에 추가합니다. 갈고리가 달린 유리봉으로 DNA 플록을 꺼내서 깨끗한 흡수지에 빨아 TE 가 들어 있는 원심관으로 옮기면 DNA 가 신속하게 TE 에 녹는다.
7. DNA 가 플록 침전을 형성하지 않으면 5000rpm 원심력 5 분 후 침전물을 te 관으로 옮길 수 있다. 이렇게 수집한 침전물은 종종 te 에 녹기 어렵지만, 60 에서? 물에 15 분 이상 두어 용해를 돕습니다.
8. 3000rpm 원심DNA 용액으로 5 분 동안 상청액을 깨끗한 5ml 원심관에 붓는다.
9. 5μl 리보 핵산 효소 (10μg/μl) 추가, 37? 10 분 RNA 제거 (RNA 는 일반적으로 DNA 조작 및 분석에 영향을 주지 않으므로 이 단계를 생략할 수 있음).
10.110 부피의 3mol/L NaAc 와 2 배 부피의 아이스 에탄올, 혼합, -20? 약 20 분 동안 가만히 있으면 DNA 가 솜모양의 침전을 형성한다.