방법 1:

1. 두 알의 연한 잎을 취하여 예냉 발우에 넣고 적당량의 액체 질소를 붓고 빠르게 분말로 갈아낸 다음 3ml 예열된 2%CTAB 추출 버퍼액과 50ul 항산화제 2- 메르기 에탄올을 넣고 약간 유동적인 반죽이나 죽 모양으로 갈아서/KK 로 옮긴다

2. 혼합물이 실온으로 냉각될 때까지 600 ul CI (클로로포름: 이소프로판올 = 24: 1) 용액을 넣고 잘 섞어서 원심관을 몇 번 살짝 뒤집어 튜브 안의 혼합물을 로션으로, 실온에서1으로 바꿔줍니다.

3. 단계 (2) 를 한 번 반복합니다.

4. 단계 (3) 의 상청액에 2.5 배의 부피의 무수에탄올을 넣고 자세히 섞어서-20 C 에서 30 분 이상 냉장, 4 C 에서 DNA 를 침전시켜 65438 02000RPM 원심 65438 00 분으로 한다.

5. 상층 유기용제를 버리고 에탄올 500ul75% 세탁 침전, 4 C 하 8000rpm 원심 5min, 상청액 폐기, 세탁 3 회.

6. 거꾸로 또는 37 도 배양함 건조.

7. 50 마이크로리터 완충액을 넣어 DNA 를 녹이고-20 C 에서 냉장 보관하여 준비한다.

방법 2:

1. 50 밀리리터의 원심관에 20 밀리리터의 추출 완충액 I 를 넣고 60 C 수조에서 예열합니다.

2. 식물 5- 10g, 잘게 썰어 연발에서 액체 질소를 넣어 가루로 갈아서 바로 예열된 원심관에 붓고 힘껏 흔들어주세요. 60 C 수욕은 30-60 분 (시간이 길고 DNA 수율이 높음).

3. 20ml 염소 모조/펜틸알코올/에탄올 용액을 넣고 거꾸로 섞는다 (장갑을 끼고 피부 손상을 방지해야 함), 실온에서 5- 10 분 동안 그대로 두어 수상과 유기를 분리한다 (필요한 경우 다시 섞는다).

4. 실온에서 5000rpm 속도로 5 분간 원심합니다.

5. 상청액을 다른 50ml 원심관으로 조심스럽게 옮기고 1 배 부피의 이소프로판올을 넣고 섞어서 실온에 일정 기간 방치해 솜모양의 DNA 침전을 일으킨다.

6. 1ml TE 를 1.5 mlependorf 에 넣고 갈고리가 달린 유리봉으로 DNA 플랩을 꺼내 깨끗한 흡수지에 빨아 TE 가 들어 있는 원심관으로 옮기면 DNA 가 빠르게 TE 에 용해된다

7. DNA 가 플록 침전을 형성하지 않으면 5000rpm 원심력 5 분 후 침전물을 te 관으로 옮길 수 있다. 이런 방법으로 수집한 침전물은 종종 te 에 녹기 어렵고 60 C 의 수조에 15 분 이상 넣어 용해를 도울 수 있다.

8. 3000rpm 원심DNA 용액으로 5 분 동안 상청액을 깨끗한 5ml 원심관에 붓는다.

9. 5 μ lrna sea (10 μ g/μ l) 37℃10 분을 추가하여 RNA 를 제거합니다 (RNA 는 일반적으로 DNA 운영 및 분석에 영향을 주지 않으므로 이 단계를 생략할 수 있음).

10.110 부피의 3mol/L NaAc 와 2× 부피의 아이스 에탄올을 넣고 섞어서-20 C 에서 20 분 정도 묵는다

1 1. 유리봉으로 DNA 침전을 제거하고 70% 에탄올로 헹구고 깨끗한 흡수지에 빨아들인다.

12. DNA 를 1 ml Te 에 녹여 -20 에 저장합니다.

13. 2μlDNA 샘플을 가져와 0.7% 아가로 오스 젤에서 전기 영동하여 DNA 의 분자 크기를 검출한다. 동시에 15μl 을 20 배 희석하여 OD260/OD280 의 DNA 함량과 품질을 측정한다.

방법 3:

식물 DNA SDS 추출;

테스트 시약:

1. 연삭 완충액: 59.63gNaCl, 13.25g 구연산 삼나트륨, 37.2 g EDTA-Na 를 각각 녹여 하나로 합쳐 0.2mol/L NaOH 를 ph 7.

2. 10×SSC 용액: 87.66gNaCl 과 44. 12g 구연산 삼나트륨을 각각 용해시켜 1000ml 로 정용한다.

3. 1×SSC 용액: 10×SSC 용액으로 희석 10 배.

4.0. 1×SSC 용액: 1×SSC 용액으로 희석 10 배.

5. 리보핵산효소 용액: 0. 1.4 mol/l NaCl 용액으로 25mg/ml 효소액, 1mol/LHCl, pH 5.0

6. 염소 모조-이소 아밀 알코올: 클로로포름 24 밀리리터를 1 밀리리터와 섞는다.

7.5mol/L 과염소산나트륨 용액: NACLO4 H2O70.23G 를 취하고 먼저 증류수를 약간 넣어 녹인 다음 100ml 로 준비한다.

8.SDS (12 탄기황산나트륨) 화학 시약 재결정: SDS 를 무수에탄올에 넣어 포화시킨 다음 70 ~ 80 C 의 수조에 녹여 뜨거울 때 여과하고 식힌 다음 냉장고에 필터를 넣어 실온에서 건조시켜 준비한다.

9, 1 무어/리터

10, 0.2 무어/수산화나트륨.

1 1, 디 페닐 아민 아세트 알데히드 시약: 1.5g 디 페닐 아민은 100ml 빙초산에 용해되어/kloc-0-0 을 첨가한다

12, 1.0mol/L 고산성 용액 (HClO4).

13, 0.05 무어/수산화나트륨.

14, DNA 표준용액: DNA25mg 표준DNA 를 소량 0.05mol.L- 1NaOH 에 녹인 다음 0.05mol/ln NaOH 로 부피를 25ml 에 달합니다.