1. 단백질과 막의 결합 원리
단백질과 막의 결합 원리, 알려진 결합력은 소수력 \H 키 \ 정전력 등이다. 정확한 결합 원리는 아직 명확하지 않다. 주로 가설에 의해 뒷받침된다. 두 가지 주요 가정이 있습니다.
1) 먼저 정전기를 통해 결합한 다음 H 키와 소수작용을 통해 장시간 결합한다.
2) 먼저 소수작용을 통해 결합한 다음 정전기를 통해 장시간 결합한다.
두 가설 모두 결합 과정이 두 단계, 먼저 결합, 후장 결합으로 나뉜다. 조합 원리의 모호성으로 인해 이 분야의 작업은 실천 경험에 크게 의존한다.
접착에 대한 필름의 영향
1) 막 구멍 지름
일부 기술자는 막 구멍 지름으로 서로 다른 막을 구분하는 경향이 있지만, 이는 같은 업체의 제품에만 국한된다는 점에 유의해야 한다. 만약 제품이 다른 제조업자의 것이라면, 이런 비교는 의미가 없다. 이미 막 구멍 지름과 색상 스펙트럼 속도 사이의 관계에 대해 설명했습니다.
막 구멍 지름이 줄어들면서 막의 실제 사용 가능한 표면적이 증가하고 막 결합 단백질의 양도 증가한다. 표면적을 추정하는 데 사용되는 매개변수는 표면적 비율 (사용된 막의 평평한 면적에 대한 실제 사용 가능한 표면적의 비율) 입니다.
또한 막의 구멍 지름이 작을수록 레이어 분석 속도가 작을수록 금표 복합물이 T 선을 통과하는 시간이 길수록 반응이 더 완전해집니다.
위의 두 점을 종합하면 막의 구멍 지름이 작을수록 감도가 높다는 결론을 얻을 수 있다. 그러나 운행 속도도 느려지고 비특이적 결합의 기회, 즉 위양성이 높아진다. 따라서 테스트 결과에 따라 실제 엔지니어링에 적합한 막을 선택하여 적절한 균형점을 찾아야 한다.
2) 다른 제조업체의 막 차이
이 차이는 주로 두 가지 점에서 비롯됩니다.
1> 막을 생산할 때 사용하는 중합체와 표면활성제의 출처, 종류, 수량이 모두 다르다. 마찬가지로, 막 처리에서 이 두 물질은 일반적으로 성능에 큰 영향을 미친다.
2> 치료 과정은 다릅니다.
3. 생물학적 원료, 시약 및 완충 용액 제형
1) 생물원료는 CT 라인의 생물원료로, 상황에 따라 사용하며, 여기서는 간단한 소개만 합니다.
첫째, 단일 복제 항체 및 멤브레인의 조합은 멀티 복제 항체 보다 낫다, 주로 멀티 복제 항체 때문에 많은 다른 표면 비트를가지고, 각 비트와 멤브레인의 최적 결합 조건은 약간 다른, 이는 의심할 여 지 없이 최적화의 어려움을 증가 합니다.
둘째, 분자량이 클수록 단백질은 고체 물질과 결합하기가 더 어렵다.
2) 완충액
사람들이 가장 염려하는 것은 완충액, 폐쇄액 등 성능이 우수한 배합표를 얻는 것이다.
사실, 나는 너에게 범용 공식 목록을 제공할 수 없다. 서로 다른 반응체계는 서로 다른 레시피를 필요로 하고, 기관마다 반응체계가 다르기 때문이다. "물고기" 를 얻으려면 먼저 낚시를 배워야 한다. 여러분을 오도하지 않기 위해서, 저는 다음과 같은 공식과 관련된 문제에 대해서만 아이디어를 제공합니다. 구체적인 공식은 스스로 탐구하세요.
일반 버퍼액의 구성은 PBS (또는 기타 버퍼 시스템)+활성 물질 (특정 문제에 대한) +PH 조절입니다. 이전의 각종 자료를 참고하여, 나의 개인적인 견해는 배합표 원칙이 간단하고 복잡하지 않고, 자신의 필요에 따라 활성 물질을 첨가해야 한다는 것이다. 원래 첨가해야 했던 많은 활성 물질은 제막 기술의 향상으로 더 이상 필요하지 않다.
권장 버퍼 시스템은 0.0 1M PBS PH7-7.2 로 다양한 항원과 항체 적응성이 뛰어납니다.
활성 물질의 상황은 대략 다음과 같습니다.
소량의 NACL 은 신호 강도를 낮추고 위양성을 제거한다.
유기 알코올 (메탄올, 이소프로판올 등. ) 박막을 적셔 박막이 휴대하는 정전기를 줄여 코팅을 결합하는 데 도움이 된다. 개인적으로 권장하지 않습니다. 영화 제작 공예가 향상되기 때문입니다.
표면활성제 (TW20, TX 100) 는 친수성을 증가시켜 빈 실 현상을 피하고 색상을 증가시킬 수 있다.
설탕 보호제는 노화 속도를 늦추고 친수성을 증가시킬 수 있다.
산성도를 일정한 위치로 조절하면 가짜 양을 없앨 수 있다.
4. 샘플 환경
주변 습도는 박막 퇴적 과정에 매우 중요하다. 최적 습도는 일반적으로 45-65% 입니다.
습도가 너무 낮을 때, 필름에 정전하를 축적하기 쉽고, 필름에 반점이 생기기 쉬우며, 테스트에 소수성 반점이 생길 수 있다.
습도가 너무 높을 때, 박막상의 모세작용이 강화되어, 점형 박막은 쉽게 CT 선이 넓어지거나 확산될 수 있다.
샘플링할 때 필름 습도의 균일성을 보장하기 위해 일반적으로 샘플링하기 전에 이 습도 조건에서 일정 기간 동안 필름을 배치합니다.
샘플링 장비와 막 표면 상태 사이의 관계.
현재 샘플링 방법에는 스크래치 필름과 비접촉 점막식의 두 가지가 있습니다. 비접촉점막식은 스크래치식보다 우수하고, 수입 스크래치막식은 국산 스크래치식보다 우수합니다.
스크래치막법은 호스로 표면을 긁는 항체, 막 자체의 물리적 성질이 부드럽고 바삭하기 때문에 스크래치관은 표면에 흔적을 남깁니다. 수입 스크레이퍼는 더 나은 재료와 제어 시스템을 채택하고 있어 스크래치가 가볍고 국산 기기는 열악하여 남은 스크래치가 더 심하다. 스크래치는 레이어 분석 금표 복합물에 쉽게 저항성을 형성하여 위양성을 유발한다. 동시에 달리기를 할 때 T 선 위치에 가는 선 (귀신선) 이 있으면 쉽게 나타난다.
필름의 폭 및 스폿 위치
필름의 폭은 일반적으로 18mm (또는 20mm) 및 25mm 으로 각각 시험지와 테스트판에 사용됩니다.
그러나 t-선 샘플링 위치에 따라 감도가 달라집니다. 샘플 위치가 위로 이동하면 금 표준 화합물이 T 선 위치를 통과하는 속도가 느려지고 반응 시간이 증가하며 감도가 향상됩니다. 반대로 감도는 떨어집니다. 이 방법은 감도를 변경하고 위양성을 제거하는 데 사용할 수 있습니다.
7. 필름에 용액의 확산
일반적으로 막상 용액의 샘플 양은 1ul/cm 입니다.
막상 용액의 확산은 양단으로 향하고, 스프레이 포인트는 균일한 항체 용액이다. 그러나 건조 시 선 가장자리 의 건조 속도 는 중간 보다 높 고 중간 의 항체 은 계속 양변 으로 확산 될 것 이기 때문에 건조 후 항체 은 선 의 양끝 에 모일 것 이다. 일반적으로 실험에 영향을 미치지 않습니다. 선의 양끝이 빨갛고 중간이 밝다는 것을 알게 되면 이 문제를 고려해야 한다. 위에서 언급한 작용 물질을 넣어서 해결할 수 있다.
8. 필름 부착 전후의 밀봉 효과
공급업체로부터 구입한 필름은 기본적으로 모두 최적화되었으며 직접 사용할 수 있습니다. 그러나 우리는 폐쇄에 대한 토론을 자주 만난다.
사실 폐쇄는 모두가 생각하는 것과는 다르다. 일단 닫히면 모든 것이 순조롭게 풀릴 것이다. 오래된 문제가 사라지고, 새로운 문제가 또 와서 더욱 번거로워졌다. 제가 말하고자하는 것은 클로저를 신중하게 사용하는 것입니다.
나는 먼저 후점막을 봉하는 방법을 극도로 반대한다. 그 이유는 제조사가 필름을 생산할 때 각종 레시피가 모두 원료와 섞여 있기 때문이다. 그들이 점막 앞에 막을 봉할 때, 반드시 막을 봉액에 담가야 하는데, 이것은 필연적으로 막중의 물질의 정상적인 분포를 방해할 것이다. 이로 인해 많은 문제가 발생하여 업무 효율성이 떨어졌다. 어떤 공장들은 막을 봉하지 않으면 막을 수 없는 문제가 발생하는데, 사실 다른 방법으로 해결할 수 있으니, 봉막은 반드시 측정해야 한다.
내가 자주 사용하는 밀봉 기술은 두 가지가 있다.
흐름이 닫히고 활성 물질이 샘플 패드에서 처리됩니다.
막은 고정점에 밀봉되어 있고, 활성 물질은 용액으로 혼합되어 막의 특정 위치에 뿌려진다. 이 방법은 비오돔의 공기 스프레이 노즐을 사용해야 하는데, 이는 불합격한 반제판을 부활시킬 수 있다.
막 위에 밀봉만 하면 제품의 안정성에 영향을 미칠 수밖에 없다. 구체적인 영향의 정도는 안정성 실험을 통해 판단해야 한다.
9. 막 저장
새로 생산된 박막은 일반적으로 5- 10% 의 수분을 함유하고 있다. 영화의 노화 메커니즘은 이론적 지원이 있지만 논란이 있다. 이론에 따르면, 박막의 노화는 박막상의 수분이 증발하여 박막이 소수성, 전기, 깨지기 쉽기 때문이다. 필름을 보관하기 위한 일반적인 요구 사항은 빛을 피하는 밀봉이다. 너무 건조하거나 너무 젖은 것은 모두 불리하다. 이런 저장 조건 하에서는 일반적으로 2 년 동안 보관할 수 있다. 하지만,
생산 공정의 문제로 인해 일부 막은 사용 후 일정 기간 동안 감도가 변할 수 있다. 이런 문제가 발생하면 막을 주문한 후 일정 기간 두고 안정한 후 시운전 생산에 투입해야 한다.