생물학 전공 학생들에게 "PCR" 을 소개하도록 요청하십시오.

중합 효소 연쇄 반응

첫째, PCR 개요

1, PCR 이란 무엇입니까

중합효소 체인형 반응 (PCR) 은 체외 특정 DNA 서열의 무세포 분자 복제 또는 유인물 유도의 효소 증폭이라고도 불린다. 미국 과학자 PE(Perkin Elmer Perkin-Elmer) 유전학과의 Mullis 박사가 발명한 Mullis 박사는 PCR 기술이 이론과 응용에 있어서의 획기적인 의미로 1993 노벨 화학상을 수상했다.

2.PCR 기술 개발 역사

PCR 의 원리는 동물과 식물의 체외에서 특정 유전자 (DNA) 단편을 빠르게 증폭시키는 한 쌍의 유인물에 의해 매개된다. N 개의 열순환의 증폭을 거친 후 증강산물 중 특이성 유전자의 수는 (1+e) n (0 < e < 1, 증강효율은 배로 증강산물 중 특이성 유전자를 검출할 수 있게 한다.

중합 효소 사슬 반응은 1993 부터 4 세대 제품을 거쳤다.

1 세대: 인공/로봇 수조 유전자 증폭

위 그림과 같이 세 개의 항온수조를 사용하여 세 개의 수욕의 온도를 세 개의 온도, 즉 PCR 의 고온변성 온도 (예: 94 C), 저온 보복 온도 (예: 58 C) 및 적절한 온도 확장 온도 (예: 72 C) 로 유지합니다. 그런 다음 PCR 표본 시험관이 들어 있는 바구니를 손으로 서로 다른 온도의 수조에서 순차적으로 목욕을 하고, 각 수조에서 표본의 항온 시간은 스톱워치로 시간을 잰다. 이렇게 하면 PCR 샘플에서 다음과 같은 형태의 열 사이클을 완료할 수 있습니다.

94℃30 초 58℃45 초 72℃60 초

40 주기

이 방법의 특징은 실험자의 노동 강도가 커서 피로로 인해 오차가 발생하기 쉽다는 것이다. 장점은 설비가 간단하고 투자가 적으며 완전 자동 유전자 증폭기보다 온도를 올릴 필요가 없고, 실험 시간이 짧고, 실험이 이상적인 PCR 반응 조건에 더 가깝다는 점이다. 실험 효과는 여전히 좋지만, 표본관이 한 수조에서 다른 수조로 이동할 때 공기에 노출되는 시간이 짧기 때문에 이동 속도가 빠르지 않으면 표본에 온도 간섭을 일으킬 수 있어 결과에 영향을 미친다. 이 방법의 다른 단점은 세 가지 온도 단계 (일부 PCR 반응에는 세 개 이상의 온도 단계가 필요함), 액체 오염, 저압 지역에서는 수온을 94 C 변성 온도로 태우기 어렵다는 점도 있다.

이 방법의 자동화 수준을 높이기 위해 위에서 언급한 인공이동 표본 대신 로봇 장치를 설계하고 로봇 수조식 유전자 증폭기를 구성했다. 이러한 개선은 실험자의 고강도 노동 문제를 해결했지만, 로봇 부품이 긴 여정에서 잦은 상대 운동으로 인한 높은 고장도 가져왔다. 이런 종류의 유전자 증폭기는 90 년대 중반의 베이징과 상해에서 모두 판매되어 널리 사용되었다. 그것은 우리나라 분자생물학의 발전에 긍정적인 공헌을 한 적이 있는데, 나중에는 점차 자동화 수준이 높은 증폭기로 대체되어 지금은 단위에 의해 거의 사용되지 않는다.

2 세대: 정성 유전자 증폭기의 자동 제어

위에서 언급한 수욕식 증폭기에 비해 건식 유전자 증폭기라고 불리는 대표적인 증폭기로, 뒤에서 소개한 3 세대와 4 세대를 포함해 모두 2 세대를 기초로 정량 검사 부분을 통합했다.

3 세대: 종점 정량/반정량

2 세대 정성 PCR 은 음성과 양성만 판단할 수 있고 특정 핵산의 농도와 정량 분석은 평가할 수 없다. 정량 PCR 은 최소한 다음과 같은 질적 PCR 이 실현할 수 없는 기능을 실현할 수 있습니다.

-응? 잠복 바이러스 농도 검출

-응? 감염 정도

-응? 병원성 병원체 측정

-응? 항 바이러스제의 효능 평가

-응? 회복기 바이러스 부하 감지

미국 ABI 가 1996 년 첫 형광정량 PCR 기를 발명한 이후 PCR 기술과 응용은 질적에서 정량으로 급속히 발전했다. 종점 정량 PCR 의 장점은 설비 투자가 적다는 것이다. 국내 경제 여건에 비싼 실시간 형광 정량 PCR 기기를 감당할 수 없는 과학연구 단위와 의료기관의 경우 기존의 2 세대 정규 정성성 PCR 기기를 사용하여 전용 단공 PCR 종점산물 형광 정량 검출기를 늘려 작업을 시작해 정량 역할을 할 수 있다. 종점 정량 PCR 기술은 정성에서 실시간 정량으로의 전환의 중간 산물이다. 수입제품은 적고 국산기기는 많은데, 예를 들면 Xi 안천룡의 TL988 과 상해영광의 DA620 이 있습니다.

4 세대: 실시간 정량 PCR

실시간 정량 QCPR 기기+실시간 형광 정량 시약+범용 컴퓨터+자동 분석 소프트웨어는 QPCR-DNA/RNA 실시간 형광 정량 검출 시스템을 구성합니다.

아래 그림 참조: (약간)

2. 실시간 형광 정량 PCR 의 장점:

이 장치는 형광 정량 시스템과 컴퓨터로 구성되어 주기 중 형광을 모니터링하는 데 사용됩니다. 실시간 장치에 연결된 컴퓨터는 형광 데이터를 수집합니다. 데이터는 개발된 실시간 분석 소프트웨어를 통해 차트로 표시됩니다. 원시 데이터는 형광 강도 대 순환 횟수의 그래프로 그려집니다. 원시 데이터를 수집한 후 분석을 시작할 수 있습니다. 실시간 장치 소프트웨어는 수집된 데이터를 정규화하여 배경 형광의 차이를 보완할 수 있습니다. 표준화 후 형광 데이터를 분석하는 수준인 임계값 수준을 설정할 수 있습니다. 샘플이 임계값 수준에 도달했을 때 경험하는 주기 수를 Ct 값 (한계점의 주기 수) 이라고 합니다. 임계값 설정은 지수 기간의 증폭 효율을 극대화해야 가장 정확하고 반복 가능한 데이터를 얻을 수 있다. 해당 농도로 표시된 표준품도 있는 경우 선형 회귀 분석은 알 수 없는 샘플의 농도를 계산하는 데 사용할 수 있는 표준 곡선을 생성합니다.

실시간 형광 정량 PCR 기술 원리.

실시간 Q-PCR 기술이란 PCR 반응 시스템에 형광 유전자를 넣고 형광 신호의 축적을 이용하여 전체 PCR 과정을 실시간으로 모니터링한 후, 마지막으로 표준 곡선을 통해 알 수 없는 템플릿을 정량적으로 분석하는 방법을 말한다. 실시간 기술의 발전에는 두 가지 중요한 발견이 중요한 역할을 했다. (1)90 년대 초, Taq DNA 중합 효소의 핵산 외체효소 활성 발견은 특정 형광 프로브를 분해해 PCR 산물을 간접적으로 감지할 수 있게 했다. (2) 이후 형광 이중 표시 프로브를 사용하여 밀폐된 반응관에서 전체 반응 과정을 실시간으로 모니터링합니다. 이 두 발견의 결합과 해당 기기 및 시약 상용화는 연구 작업에 실시간 Q-PCR 의 응용으로 이어졌다.

PCR 반응 과정에서 생성된 DNA 사본 수는 기하급수적으로 증가했다. 반응 주기 수가 증가함에 따라 최종 PCR 반응은 더 이상 기하급수적으로 템플릿을 생성하지 않고 플랫폼 기간으로 들어갑니다. 전통적인 PCR 에서는 젤 전기 수영 분리와 형광 염색을 자주 사용하여 PCR 반응의 최종 증폭산물을 감지하기 때문에 이 종점 방법을 통해 PCR 산물을 정량화하는 것은 믿을 수 없다. 실시간 Q-PCR 에서는 전체 PCR 반응 증폭 과정을 실시간으로 모니터링하고 증폭과 관련된 형광 신호를 지속적으로 분석합니다. 반응 시간이 진행됨에 따라 감지된 형광 신호의 변화를 곡선으로 그릴 수 있습니다. PCR 반응 초기에 형광의 수준은 배경과 크게 구분할 수 없었고, 형광은 지수 기간, 선형 기간 및 최종 플랫폼 기간을 생성하므로 PCR 반응의 지수 기간 중 어느 지점에서 PCR 산물의 양을 감지할 수 있으며, 이로써 템플릿의 초기 함량을 추정할 수 있습니다. 테스트된 샘플을 쉽게 비교하기 위해 실시간 Q-PCR 반응의 지수 기간에는 형광 신호 임계값을 설정해야 합니다. 이 임계값은 일반적으로 PCR 반응 전 15 사이클의 형광 신호를 형광 배경 신호로 사용하며 기본값은 3 ~ 15 개의 순환 형광 신호 표준 편차의 65438 입니다. 감지된 형광 신호가 임계값을 초과하면 실제 신호로 간주되며 샘플의 임계값 주기 수 (Ct) 를 정의하는 데 사용할 수 있습니다. Ct 값은 각 반응 튜브의 형광 신호가 설정된 임계값에 도달할 때 경험하는 주기 수입니다. 연구에 따르면 각 템플릿의 Ct 값과 템플릿의 초기 복사 수의 로그 사이에 선형 관계가 있는 것으로 나타났습니다. 초기 복제본 수가 많을수록 Ct 값이 작아집니다. 초기 복사 수를 알고 있는 표준품을 사용하여 표준 곡선을 만들 수 있으므로 알 수 없는 샘플의 Ct 값만 얻으면 표준 곡선에서 샘플의 초기 복사 수를 계산할 수 있습니다.

4. 실시간 형광 정량 PCR 기술을 의료에 응용한다.

⑴ 병원체 검사: 현재 형광 정량 PCR 검사 기술을 이용하여 임구균, 트라코마, 지균, 인유두종 바이러스, 단순 포진 바이러스, 인간 면역 결함 바이러스, 간염 바이러스, 인플루엔자 바이러스, 결핵균, EB 바이러스, 거세포 바이러스 등 병원체 정량 검사를 할 수 있다. 기존 테스트 방법에 비해 감도가 높고 샘플 사용량이 적으며 빠르고 간편하다는 장점이 있습니다.

예를 들어 결핵 유전자 진단의 중요성은 주로 다음과 같습니다.

A. mycobacterium tuberculosis 를 다른 mycobacterium 과 구별합니다.

B. 결핵 내성 유전자 검출;

C. 결핵의 양성 검출률을 증가시킨다.

⑵ 산전 진단: 지금까지는 유전물질 변화로 인한 유전질환을 치료할 수 없었고, 산전 모니터링을 통해 병든 아기의 출생을 줄임으로써 각종 유전질환의 발생을 예방할 수 밖에 없었다. 예를 들어, X 연쇄 유전병 환아의 출생을 줄이기 위해 임산부 외주혈에서 태아 DNA 를 분리하고 실시간 형광 정량 PCR 을 통해 Y 성 결정구 유전자를 검출하는 것은 무창적인 방법으로 임산부가 쉽게 받아들일 수 있다.

약물 효능 평가: B 형 간염 바이러스 (HBV) 와 C 형 간 바이러스 (HCV) 에 대한 정량 분석에 따르면 바이러스의 양이 특정 약물의 효능과 관련이 있는 것으로 나타났다. 높은 수준의 HCV 표현은 인터페론 치료에 민감하지 않지만, 낮은 역가의 HCV 는 인터페론 치료에 민감하다. 라미부딘 치료 과정에서 HBV-DNA 의 혈청 함량이 한때 감소한 뒤 다시 한 번 상승하거나 이전 수준을 넘어 바이러스가 변이되었음을 시사한다. 예를 들어, HBV 테스트에서 PCR 의 적용과 중요성;

A. 체내에서 b 형 간염 바이러스의 수를 알아보다.

B. 복제 여부.

C. 전염성 여부, 전염성 크기.

D. 약을 먹을 필요가 있는지 여부.

E. 간 기능 이상 변화가 바이러스에 의한 것인지 여부.

F. 어떤 항바이러스제가 환자에게 적합한지 판단한다.

G. 약물 치료의 효능을 판단하십시오.

⑷ 종양 유전자 검출: 종양의 발병 메커니즘은 아직 명확하지 않지만 관련 유전자의 돌연변이는 발암 전환의 근본 원인으로 널리 받아들여졌다. 암 유전자 표현의 증가와 돌연변이는 많은 종양의 초기에 나타날 수 있다. 실시간 형광 정량 PCR 은 유전자 돌연변이를 효과적으로 감지할 수 있을 뿐만 아니라 종양 유전자의 표현도 정확하게 감지할 수 있다. 현재 이 방법은 텔로메라제 hTERT 유전자, 만성 골수세포 백혈병 WT 1 유전자, 종양 ER 유전자, 전립선암 PSM 유전자, 종양 관련 바이러스 유전자 등의 표현을 검출하는 데 사용되고 있다. 종양과 관련된 새로운 유전자가 발견됨에 따라 형광 정량 PCR 기술은 종양 연구에서 더 큰 역할을 할 것이다.

(5) 우생학에서의 응용:

최근 몇 년 동안 경제의 급속한 발전과 인민의 생활수준이 해마다 높아짐에 따라 사람들은 자신과 가족의 건강, 특히 차세대의 건강에 점점 더 관심을 기울이고 있다. 또한 우리나라의 가족계획 사업이 점차 깊어지면서 외동 자녀가 늘면서 아이의 체력이 어른들의 관심의 초점이 되고 있다. 따라서 신생아의 자질과 인간의 유전적 자질, 즉 우생육을 어떻게 향상시킬 것인가가 매우 중요해졌다. ① 심각한 유전성 질환과 선천성 질환이 있는 개인의 출생을 피한다. ② 체력과 지능이 우수한 개인의 번식을 촉진한다. 이 가운데 심각한 유전병과 선천성 질환이 있는 개인의 출생을 피하는 것은 우생학의 가장 기본적인 내용이다. 임상 우생학의 관점에서 볼 때, 임신 중에 어머니와 태아에 대한 유전자 검사를 실시하고, 흔히 볼 수 있는 유전성 질환의 출생을 배제하고, 어머니의 임신 중에 톡소 플라스마, 두드러기 바이러스, 클라미디아 등 태아의 기형을 일으키기 쉬운 감염성 질환이 있는지 확인하는 것이 구체적 일이다. 예전에는 주로 염색체 분석을 통해 유전병을 검사했지만, 임상적으로 대부분의 유전병은 염색체 질환이 아니라 유전병이었고 염색체 분석은 검출되지 않았다. (윌리엄 셰익스피어, 유전병, 유전병, 유전병, 유전병, 유전병, 유전병) PCR 유전자 증폭에 단일 체인 구조 다형성 분석 (SSCP), 제한 단편 길이 다형성 분석 (RFCP), 등위 유전자 특이성 과뉴클레오티드 산 (Aso) 점 교배 또는 차이 PCR 을 결합하면 단일 유전자의 돌연변이를 쉽게 감지할 수 있어 정확도가 95% 이상에 이를 수 있어 이 문제가 잘 해결된다. 태아 기형을 일으키기 쉬운 흔한 전염병은 단순 포진 바이러스 (HSV), 두드러기 바이러스 (RV), 인간 거세포 바이러스 (HCMV), TOX, 트라코마 (CT) 로 병원체 된다. 이전에는 이러한 병원체 감염에 대한 진단이 비교적 어려웠는데, 주로 양성 방법을 통해 진단을 진행했다. 하지만 배양법은 시간이 많이 걸리고 비용이 많이 들며 샘플링, 표본 보존, 약의 영향을 받아 임상적으로 보급할 수 없다. PCR 유전자 증폭법은 민감성과 특이성이 높기 때문에 이러한 질병의 진단과 치료 효과 추적에 가장 적합한 검사 방법이다.

1.PCR 유전자 증강법은 유전병의 산전 진단에 사용된다. 유전성 질환은 유전자 변화로 인해 기체의 어떤 기능, 결함, 이상 등으로 인한 질병으로, 근본적인 변화는 유전물질에 있다. 그 유형에는 단일 유전자 유전병, 염색체 유전병, 다중 유전자 유전병이 포함된다. 유전병의 진단은 병력 문의, 일반 신체진단, 일반 실험실 검사, 증상 징후 이해 외에도 특수성이 있다. 평소 계보 분석, 염색체, 성염색을 유전병 진단의 주요 근거로 관련 효소 분석을 보완해 진단을 내렸다. 분자생물학의 급속한 발전과 유전성 질환 진단에 광범위하게 적용됨에 따라 유전자 진단 기술이 탄생하여 유전성 질환의 임상 진단을 크게 촉진시켰다. 중합효소 사슬 반응 (PCR) 은 유전자 진단의 주요 기술 중 하나이다. 이 빠르고 예민한 체외 유전자 증폭 기술은 알려진 대부분의 유전자 돌연변이, 유전자 누락, 염색체 이탈 등을 감지할 수 있다. PCR 기술은 나날이 유전병을 진단하는 가장 효과적이고 믿을 수 있는 방법 중 하나가 되고 있다. 다음은 중국에서 보편적 인 의미를 지닌 몇 가지 예입니다.

(1) PCR 을 통해 지중해 빈혈을 검출합니다. 지중해 빈혈은 유전성 만성 용혈성 빈혈로, 세계에서 가장 흔하고 흔히 볼 수 있는 단일 유전병이다. 광둥 (), 광서 (), 구이저우 (), 쓰촨 () 등지에서는 발병률 () 가 높고 광서 () 등지에서는 15% 에 달한다. 지중해 빈혈은 유전자 돌연변이로 인해 글로빈 불균형이 발생하여 구조가 정상적인 플루토늄 체인 합성이 줄어들거나 합성되지 않아 용혈성 빈혈로 나타난다. 유전자를 받아들이는 유형은 알파, 베타, 텅스텐으로 나뉘는데, 그 중 α, 베타 지중해빈혈이 가장 흔하고 피해가 가장 크다. 글로빈 유전자 클러스터는 인간 6 번 염색의 짧은 팔에 위치하고 있으며, 두 개의 반복 유전자는 알파1,알파 2 에 위치해 있으며, 두 개의 알파 유전자와 그 측면 서열은 동원성이 매우 커서 염색체가 서로 다른 교환이 발생하기 쉬우며, 그로 인해 알파 유전자 결핍-알파 지중해 빈혈이 발생한다. 지중해빈혈 유전자 부분 누락에는 알파1유전자 부분 누락, 알파 2 유전자 누락, 알파1및 알파 2 유전자가 모두 누락되고 누락되지 않은 지중해 빈혈이 포함됩니다. PCR 은 알파1및 알파 2 유전자를 증폭시키고, 이러한 유전자가 누락되거나 돌연변이되었는지 여부를 탐지하여 지중해빈혈을 진단하는 데 사용할 수 있다. 베타-지중해 빈혈의 유전적 결함은 주로 유전자 서열 단일 뉴클레오티드의 돌연변이나 소수의 염기가 없거나 삽입되어 정상적인 베타 글로빈 사슬 합성이 감소하거나 없어지는 것으로 나타났다. (존 F. 케네디, Northern Exposure (미국 TV 드라마), 건강명언) PCR 제품과 사이트 특이성 과뉴클레오티드 프로브 (Aso) 의 점 교배는 진단에 사용할 수 있다.

(2) 페닐 아세톤 소변증: 페닐 아세톤 소변증 (PKU) 은 상염색체 열성 유전병이다. 벤젠 프로피온산 화효소가 타이로신으로 전환되기 때문에 페닐알라닌과 그 대사 산물은 체내에 축적되어 뇌 손상과 되돌릴 수 없는 지능 저하를 초래한다. PKU 환자는 태어날 때 정상이다. 신생아가 PKU 로 진단되면 모유 수유를 중단하고 페닐알라닌 경구 치료를 8- 10 년 동안 하면 환자의 지능 수준 발육을 정상적으로 유지할 수 있다. 경구 용 저 페닐알라닌은 매우 비싸기 때문에 일반 가정은 견딜 수 없습니다. 따라서 산전 진단은 아기가 태어나는 것을 막는 가장 좋은 선택이다. PAH 는 간세포에서만 발현되며 효소 활성은 혈구, 섬유세포, 양수, 융모막 세포 분석을 통해 유전자 진단을 통해서만 가능합니다. PKU 의 유전자 변화는 모든 PAH 유전자의 부족이 아니라, 주요 형식은 점 돌연변이이며, 돌연변이 부위가 많다. PCR 증폭, ASO, SSCP 또는 확장 세그먼트 길이 다형성 분석 (AmpFLA) 을 사용하여 감지해야 합니다. 이 기술들은 매우 복잡하기 때문에 검사원은 반드시 전문적인 훈련을 거쳐야 한다.

(3) 혈우병, 혈우병은 가장 흔한 유전성 응고 장애 그룹으로, 인자 결함에 따라 두 가지 (인자 ⅷ, ⅶ 결함) 로 나눌 수 있으며 복잡한 혈우병도 있지만 흔하지는 않다. 혈우병 A 의 발병률110000, 인자 VIII 유전자는 G6PD 유전자 근처, 전체 길이 186Kb 입니다. 광범위한 유전자 재정렬 (누락, 삽입, 반복) 으로 인한 혈우병 A 병례는 매우 적고 인자 ⅷ 결함의 5% 에 불과하며, 대부분의 환자는 단일 또는 소수의 염기 돌연변이로 나타난다. 인자 ⅷ 유전자 길이가 186Kb 이기 때문에 돌연변이 부위가 많고 새로운 돌연변이 빈도가 높아 임상적으로 각 돌연변이를 감지할 수 없기 때문에 몇 가지 일반적인 돌연변이 유형을 감지할 수 있다. 주요 검출 방법은 RELP 분석과 결합된 PCR 입니다. 혈우병 B 의 발병률 () 는 혈우병의 20% 를 차지하며, 그 유전자 변화와 검사 방법은 혈우병 A 와 비슷하다.

(4) 성 발달 이상. 남녀를 구별하는 물질적 기초는 성염색체이다. 포유동물의 배아 발육에서 암컷의 표형은 어떤 조절도 필요하지 않지만, 수컷표형은 여러 가지 요인에 의해 결정된다. Y 염색체에 위치한 유전자는 남성의 SSS 를 지도하며 고환 결정클러스터 (TDF) 라고 불린다. 현대연구에 따르면 SRY(Y 염색체 성별 결정구역) 유전자는 TDF 유전자로 Y 염색체 짧은 팔 끝에 위치해 있다. SRY 구역의 부재는 46XY 핵형 개체가 암컷으로 발전하기 쉽다. 유전자 검사는 SRY 게놈의 전좌와 누락을 감지하여 성별 발육 이상을 진단할 수 있다. 성별 이상을 탐구하는 이 연구는 매우 인기가 있다. 또 46XY 핵형 이상 환자, 즉 고환 여성화는 안드로겐 수용체 (AR) 유전자의 부재로 안드로겐의 과녁 유전자가 안드로겐에 반응하지 않거나 답이 불완전하기 때문이다. 병세에 따라 표현형이 다르고, AR 결핍증의 새로운 돌연변이 빈도가 높아 산발성 질환으로 나타나고 가족사가 없다. AR 유전자는 길이가 90Kb 이며 x 염색체에 있습니다. AR 유전자 이상은 대부분 개별 유전자의 염기돌연변이로 PCR 결합 ASO 또는 SSCP 를 통해 검출될 수 있다.

(5) 취성 X 증후군, 취성 X 증후군 (FRAX) 은 발병률 최고 X 연쇄정신발육 지연증후군 (XLMR) 이다. 이 증후군은 X 염색체의 바삭한 부위와 관련이 있기 때문에 이름이 붙여졌다. 대부분의 FRAX 남성의 IQ 는 50 이하이며, 나이가 들수록 IQ 가 떨어지는 경향이 있다. 인공 효모 염색체 (YAC) 복제 기술을 통해 X- 취성 부위를 덮는 YAC 클론을 분리하고, 그 복제에서 FMR- 1 (취성 X-mentai 차단-/KLOC-0) 이라는 인간 뇌에서 표현할 수 있는 유전자를 얻었다. FMR- 1 의 5' 끝에 CGG 트리 뉴클레오티드 문자열 (CGG)n 이 있습니다. 정상 인구 중 (CGG)n 은 다태성이 있고 6 ~ 46 개의 중복이 있다. 반복 수가 52 를 초과하면 해당 영역의 분할이 불안정하여 반복 수가 크게 증가합니다. 임상증상 없는 전달체 삽입 조각 길이가 500bg 미만이며 임상적입니다. 사람들은 500bp 를 사전 돌연변이와 전체 돌연변이의 경계선으로 사용한다. Frax 진단 전에 세포 유전학은 바삭한 부위를 탐지하는 데 사용되었지만 실험 조건은 엄격하여 성공률이 높지 않았다. 현재 분자유전학을 통해 사전 돌연변이와 전체 돌연변이를 진단할 수 있다. PCR 을 통해 CGG 반복 시퀀스를 증폭하고 증강산물의 길이를 탐지합니다. 돌연변이 유전자의 증폭 단편이 확대되어 체세포 이질성이 발생할 때 여러 개의 길이가 다른 증강대, 심지어 꼬리까지 나타나거나 증폭된 전돌연변이 삽입 조각이 PCR 증강능력을 초과하여 증강현상이 없다.

2.PCR 유전자 증폭 기술이' Torsch' 진단에 사용된다. 임신 초기 (1-3 개월) 에는 일부 병원 미생물이 태아의 기형을 일으키기 쉽다. 가장 흔한 병원체 중 하나는 톡스 바이러스, 두드러기 바이러스 (RV), 단순 포진 바이러스 (HSV), 트라코마 (CT), 거세포 바이러스 (HCMV) 입니다.

(1) 톡소 플라스마 PCR 검사에 따르면 톡소 플라스마 자연원지가 광범위하고 인체는 대부분 음성 감염, 저항력이 낮을 때 임상증상. 톡소 플라스마 진단이 어렵고 혈청학 방법의 민감도가 높지만 교차 위양성이 있어 최근 감염, 장기 감염 또는 단기 감염을 확인할 수 없다. 진단 방법은 생체검사나 동물 생체검사인데, 이 방법들의 양성율은 너무 낮아서 보급하기 어렵다. PCR 검사는 샘플 중 1-2 병원체 중1-2 를 체크 아웃할 수 있으며 정확도가 높기 때문에 현재 톡소 플라스마를 검출하는 가장 좋은 방법입니다. 산전 산후 검사로서 임신 전이나 임신 초기에 전혈 샘플을 뽑아야 한다. EDTA 또는 헤파린 항응고제를 사용할 수 있습니다. EDTA 항응고제는 외주혈백혈구에 TOX 가 있는지 여부를 감지하는 데 가장 효과적입니다. 톡소 검사는 불임, 반복되는 자연 유산 또는 작은 동물을 기르는 산모에게 더 중요한 임상적 의의가 있다.

(2) 두드러기 바이러스 감염: 두드러기 바이러스 (RV) 는 단일 양성 RNA 바이러스로, 인간은 풍진 바이러스의 유일한 숙주. RV 감염은 태아 기형을 유발하고 태아 면역체계의 발육에 영향을 미치기 때문에 RV 검사는 산전과 산후보건에서 매우 중요하다. RV 는 직접 배양과 IgM 항체 실험을 통해 테스트할 수 있다. 배양 방법은 시간이 오래 걸리고 다른 바이러스에 의해 자주 방해를 받는다. IgM 법은 정확하지 않고, PCR 법은 예민하고, 간단하고 빠르며, RV 감염을 탐지하는 가장 좋은 방법 중 하나이다. 두드러기 바이러스는 체내에 침입한 후 상부 호흡기에서 증식하여 얼굴 증상과 발진을 일으키고 신속하게 전신으로 확산된다. 샘플은 임산부의 삼키기, 혈청, 임산부 솜털, 임산부 양수 등이다. RV 바이러스는 RNA 바이러스로, PCR 증폭이 복잡하므로 샘플 수집의 시기와 조작의 정확성에 유의해야 한다.

(3) 단순 포진 바이러스: 단순 포진 바이러스 (HSV) 는 여러 기관의 염증을 일으킬 수 있는 DNA 바이러스로 성 접촉 전파 HSVⅱⅱ 감염 재발률이 높고 감염자의 80% 가 12 개월 이내에 재발한다. HSV 감염이 면역체계에 의해 제거된 후 소수의 환자가 평생 휴대하며 허약할 때 재발한다. PCR 은 HSV 민감성을 감지하고 HSV I/II 유형을 직접 확인할 수 있습니다.

(4) 트라코마, 트라코마 (CT) 는 성전파 질환으로 트라코마뿐만 아니라 생사기관의 감염을 일으킬 수 있다. 임질 (NG), 매독 등 고전적인 전염병과는 달리 CT 는 다른 접촉 경로를 통해 쉽게 전파된다. 몇몇 지역의 임산부 조사 결과, 이 인구는 발병률 20 ~ 30% 에 달하는 것으로 나타났다. 유럽과 미국 등에서 CT 감염은 이미 임질을 넘어 성병 1 위에 올랐다. 클라미디아 감염은 종종 음성 감염, 무증상 또는 비특이적 증상으로 진단하기 어렵다. 과거의 배양 방법은 시간이 오래 걸리고 민감성과 정확성이 부족하다. PCR 을 CT 검사에 사용할 때는 검사 목적에 따라 다른 재료를 사용해야 합니다. 성병 진단의 경우 생식도 분비물 (세포 탈락) 을 취하고, 조기 임신 환자의 경우 전혈 샘플을 검사한 다음 임신 말기나 출산할 때 질 분비물을 검사하여 산도 청소를 지도해야 한다.

(5) 인간 사이토 메갈로 (HCMV), HCMV 감염은 매우 흔하며, 원발성 단핵세포 증가증을 동반한 소수의 1 차 감염을 제외하고는 대부분 음성 감염. HCMV 는 체내에 오랫동안 잠복할 수 있다. 기체의 면역 기능이 떨어지면 바이러스가 활성화되어 심각한 질병을 일으킨다. 임산부가 임신 중에 HCMV 에 감염되면 조산, 기형, 사태, 신생아 거세포 봉입체 질환을 일으킬 수 있다. HCMV 는 포진 바이러스 제품군에 속하며 침, 소변, 궁경 분비물, 유즙에서 분비된다. HCMV 의' 금기준' 진단검사는 단층섬유세포로 바이러스를 배양하고, 다른 실험검사에는 혈청학 검사와 봉입체 검사가 포함된다. PCR 은 혈액, 생식도 분비물 면봉자 등 검사에 사용되는 새로운 HCMV 검사 방법입니다. 산전 및 산후 관리에 사용할 때는 혈액 샘플을 채취해야 한다. 임신 초기 HCMV 감염 환자의 경우 양수나 기타 임신산물을 다시 검사하고 환자를 자세히 추적하여 종합적인 판단을 내리고 적절한 의학적 조치를 취해야 한다.

PCR 은 우생학에서의 응용이 큰 장점을 가지고 있어 이 기술의 보급 응용이 이제 막 시작되었다. 수술의 정확성에 주의하여 오진을 가급적 피해야 한다. 전염병의 경우 임산부 혈액 샘플을 먼저 채취해 검사해야 하고, 의심이나 혈액에서 병원체 핵산이 검출될 경우 임산부에 대해 가능한 한 빨리 양수 등을 검사해야 한다. 태아가 심각한 유전적 감성과 중도 감염으로 기형을 일으킬 위험이 있다고 의심하든 그렇지 않든 태아 부모의 의견을 존중해야 한다.

5. 실시간 형광 정량 PCR 기술이 연구에서 일부 응용되었다.

첫째, 신약, 인간 약물 및 기타 약물의 연구 개발

각종 바이러스성 질환, 세균성 질환과 같은 일부 감염성 질환 약품의 경우 신약 개발 과정에서 신약 개발을 위해 많은 인력, 시간, 자금을 절약할 수 있다. Elisa 및 이전에 사용된 다른 방법에 비해 실시간 형광 정량 PCR 기술은 혈액이나 조직의 병원체 함량을 빠르고 정확하며 정량적으로 파악하여 약물의 효과를 분석하고 다른 배합표의 효능, 복용량 및 비용을 비교하는 데 도움이 됩니다.

이 방법은 인간 약뿐만 아니라 동물 약에도 사용할 수 있으며, 다른 경제동식물의 약물 연구에도 사용할 수 있기 때문에 약물 연구에서 널리 사용되고 있다.

둘째, 초 조기 감염 약물 및 치료 연구 개발

실시간 형광 정량 PCR 은 혈액 중 바이러스 핵산의 함량을 결정하는 데 사용되므로 환자의 체내에서 항체 발생을 기다릴 필요가 없다. 동시에, 그 감도는 Elisa 와 같지 않기 때문에 바이러스 감염 초기, 즉 혈액 중 바이러스 함량이 매우 낮을 때 확인할 수 있다. 그래서 바이러스나 세균 함량이 낮은 상황에서 어떻게 약을 쓰는지, 어떤 약을 쓰는지, 얼마나 많이 쓰는지 등 초창기에 질병을 없애는 데 기여하는 새로운 분야가 등장했다. (윌리엄 셰익스피어, 햄릿, 세균, 세균, 세균, 세균, 세균, 세균, 세균, 세균)

셋째, 약물 효능 연구, 인간 약물 및 기타 약물

이미 출시되어 있는 신약이나 장기간 사용되는 노약의 경우, 약의 효과, 복용량, 시간을 더 연구하여 이들 약물의 합리적인 응용을 더 연구하여 인류에게 유익을 줄 수 있다. 과거에 사용했던 방법은 정확하게 정량화할 수 없고 감도가 부족하기 때문에 연구해야 할 것이 많다. 한편으로, 이 분야는 연구할 만한 곳이 많고 중요한 의의가 있다.

넷째, 새로운 예후 지표를 연구한다

전염병의 경우 약물이 어느 정도 작용하면 약을 중단할 수 있다고 생각하지만, 아직 언제 약을 중단할 것인지는 명확하게 밝혀지지 않았다. 검출 방법의 민감도와 정확도의 제한으로 인해 이 지표는 불합리할 수 있다. 따라서 완치지수와 재발률과의 관계, 질병이 다른 질병으로의 전환을 더 연구해 약이나 치료법이 질병을 철저히 치유할 수 있는 견고한 이론적 토대를 마련할 필요가 있다. (데이비드 아셀, Northern Exposure (미국 TV 드라마), 건강명언)

동사 (verb 의 약어) 는 새로운 진단 및 테스트 시약 개발

기존의 많은 진단 검사 방법은 기존 배양법과 Elisa 법과 같은 빠르고 민감하며 정량적 인 요구 사항을 동시에 충족시킬 수 없으며 형광 양적 PCR 방법은 임상 질환, 상품 검사, 곡물 및 석유 검사, 식품 검사, 혈액 검사 등을 위해 새로운 시약 개발을 할 수 있습니다. , 따라서 검사의 감도, 속도 및 정확성을 향상시킵니다. 이런 종류의 시약 종류는 매우 다양하여, 개발된 시약 사회 효익과 경제 효익이 매우 크다.

여섯째, 혈액 검사 누출 탐지율

실시간 형광 정량 PCR 이 Elisa 보다 훨씬 민감하기 때문에 혈액역이나 혈액연구소는 일반적으로 Elisa 의 누출 검사율, 즉 Elisa 를 음성으로 분석하는 혈액 샘플을 분석한 다음 실시간 형광 정량 PCR 로 재검사를 하는 데 사용한다. 재검사할 때 일반적으로 Elisa 음성 혈액 샘플 24 부를 하나의 샘플로 섞어 검사한다. 이런 방법으로 상해 혈액제품이 사용하는 혈액에서 HIV 한 건이 발견되어 기증자에 대한 검사를 통해 환자가 HIV 양성임을 확인했다. 베이징시 적십자혈액센터는 베이징 혈액역에서 5 만 부의 Elisa 음성 혈액 샘플의 누출률을 측정하고 있다. 지역마다 사용되는 Elisa 시약, 방법, 로트 번호가 다르기 때문에 지역마다 이 작업을 수행해야 합니다.

형광 양적 PCR 은 빠르고 민감하며 정량적인 특징으로 인해 개인 유전자형과 약물 효능의 관계 연구와 같은 R&D 에 많이 사용된다. 연구원들은 또한 자신의 연구 프로젝트에 따라 새로운 용도를 개발할 수 있다.

TL988 실시간 형광 정량 PCR 감지 시스템 제품 소개

1, 적절한 PCR 기기를 선택하는 방법

분자 생물학의 발전을 돌이켜 보면 PCR 기술의 발명과 보급은 의심할 여지 없이 가장 중요한 장 중 하나이다. 최근 20 년 동안 PCR 기술의 지속적인 발전과 혁신 중 가장 눈에 띄는 것은 실시간 정량 PCR (ORQPCR) 입니다. 정량적인 PCR 기술은 정성에서 정량적인 PCR 로의 도약을 실현했다. PCR 프로세스를 실시간으로 모니터링함으로써 특이하고 민감하며 빠르고 반복적으로 초기 템플릿 농도를 정량할 수 있어 과학 연구와 임상 진단에 점점 더 광범위하게 응용되고 있습니다. 우리 회사는 형광 정량 PCR 의 원리부터 시작하여 형광 정량 PCR 기기의 종류와 기술을 상세히 소개하여 정량 PCR 기의 선택에 대한 상세한 참고를 제공합니다.

정량 PCR 기기는 주로 두 부분으로 구성되어 있는데, 하나는 PCR 시스템이고 다른 하나는 형광 감지 시스템이다. 위의 원리 소개에서 정량 PCR 기기를 선택하는 관건을 쉽게 알 수 있다. 정량 PCR 은 샘플과 표준품의 비교를 통해 정량을 해야 하기 때문이다. 정량 PCR 시스템의 경우 중요한 매개변수는 온도 제어의 정확도, 온도 상승, 하강 속도 등이 아니다. 기존의 PCR 은 작은 차이가 두 배로 확대되는 것을 방지하기 위해 샘플 구멍 간의 균일성을 제공합니다. 형광 검출 시스템의 경우, 다색 다중 채널 탐지는 오늘날의 주류 추세입니다. 기기의 자극 채널이 많을수록 기기의 형광소 종류가 많을수록 기기의 적용 범위가 넓어집니다. 다중 채널은 한 샘플에서 여러 형광을 동시에 감지할 수 있으며, 기기는 단일 시험관에서 여러 템플릿이나 내부 표준+샘플을 동시에 감지할 수 있습니다. 채널이 많을수록 적용 범위가 넓을수록 기기 성능이 향상됩니다. 형광 검출 시스템은 주로 여기 광원 및 검출기를 포함한다. 여기 광원은 할로겐 램프 광원, 이온 레이저 및 LED 광원을 포함합니다. 전자는 다색 필터를 배합하여 다양한 자극 파장을 실현할 수 있으며 단색 LED 는 가격이 낮고 에너지 소비량이 적으며 수명이 길다. 하지만 단색이기 때문에 다른 led 가 필요해서 다른 자극파장을 더 잘 실현할 수 있습니다. 모니터링 시스템에는 극저온 CCD 이미징 시스템과 광전증 증배관이 포함됩니다. 전자는 한 번에 여러 점을 영상화할 수 있는데, 후자는 감도가 높지만 한 번에 하나의 샘플만 스캔할 수 있다. 여러 샘플을 하나씩 스캔하여 감지하는 데는 시간이 오래 걸립니다. 정량 PCR 측정기가 고려해야 할 또 다른 요소는 소프트웨어 설계이며, 현재 최신 기기에는 일상적인 사용에 적합한 보조 소프트웨어가 있습니다. -정량적인 PCR 기술이 임상진단에 적용됨에 따라, 질병은