PCR (폴리효소 체인형 반응) 은 DNA 를 이용해 체외 95 C 변성을 단일 체인으로 바꾸는 것으로, 프라이머와 단일 체인은 저온 (보통 60 C 정도) 에서 염기상보성 페어링 원리에 따라 결합한 다음 온도를 DNA 중합효소의 최적 반응 온도 (72 C 정도) 로 조절하고, DNA 중합효소는 인산에서 오탄당으로 조절한다. 중합 효소를 기반으로 한 PCR 기기는 사실 트랜스젠더 온도, 리 폴딩 온도 및 확장 온도를 잘 조절할 수 있는 온도 조절 장치이다.
중국어 이름
중합 효소 사슬 반응
외국 이름
중합 효소 사슬 반응
축약형
중합 효소 연쇄 반응
속성
연쇄반응
PCR 생성
코란나 (197 1) 등은 먼저 체외 핵산 증폭에 대한 생각을 제시했다. "DNA 변성을 거쳐 적당한 유인물로 교잡하고 DNA 중합효소로 유인물을 확장해 이 과정을 반복하면 tRNA 유전자를 합성할 수 있다."
하지만 당시 유전자 서열 분석 방법이 아직 성숙하지 않았기 때문에, 내열성 DNA 중합 효소는 아직 보도되지 않았고, 유인물 합성이 어렵기 때문에, 이 생각은 실제적인 의미가 없는 것 같다. 또한 1970 년대 초 분자 복제 기술의 출현은 유전자를 복제하고 증폭하는 방법을 제공했기 때문에 코란나의 생각은 잊혀졌다.
1985 년, 사이터스에서 일할 때, Kary Mullis 는 PCR 을 발명했다. 무리스는 염기서열분석을 위해 DNA 프라이머를 합성하려고 했지만, 템플릿 DNA 가 부족할까 봐 늘 걱정했다.
1983 년 4 월의 어느 금요일 밤, 그는 차를 몰고 그의 시골 별장으로 가고 있었는데, 갑자기 머릿속에' 중합효소 체인반응' 이라는 생각이 번쩍였다.
1983 부터 65438+2 월까지 Mullis 는 동위원소 표시를 통해 10 주기 이후 첫 번째 길이가 49 BP 인 PCR 조각을 보았습니다.
10 월 25 일, 1985, 1987 PCR 특허 출원, 7 월 28 일 승인 (특허 번호: 4683202), 무리스는
1985 65438+2 월 20 일 사이언스 잡지에 PCR 의 첫 학술 논문을 발표했습니다. Mullis 는 공동 저자입니다.
1986 년 5 월, 모리스는 냉천항 실험실에서 특집 보고서를 작성하며 전 세계가 PCR 방법을 배우기 시작했다. [1]
PCR 원리
DNA 의 반보수 복제는 생물 진화와 세대의 중요한 방식이다. 이중 가닥 DNA 는 다양한 효소의 작용으로 변성하고 단일 체인으로 해체될 수 있으며, DNA 중합효소의 참여로 염기상보성 쌍의 원리에 따라 같은 두 분자의 복사본을 복제할 수 있다. 실험에서 밝혀진 바에 따르면 DNA 는 고온에서 변성하여 녹을 수 있고, 기온이 내려갈 때 쌍사슬을 다시 접을 수 있다. 따라서 DNA 의 변성 및 리 폴딩은 온도 변화에 의해 제어 될 수 있으며, DNA 중합 효소 및 dNTP 는 설계된 프라이머를 추가하여 특정 유전자의 체외 복제를 완료 할 수 있습니다.
그러나 DNA 중합 효소는 고온에서 비활성화될 수 있기 때문에 매 순환마다 새로운 DNA 중합 효소를 첨가해야 하는데, 조작이 번거로울 뿐만 아니라 비용이 많이 들어 PCR 기술의 응용과 발전을 제한한다.
내열성 DNA 중합 효소 Taq 효소의 발견은 PCR 응용의 이정표이다. 이 효소는 활성을 잃지 않고 90 C 이상의 고온을 견딜 수 있어 PCR 기술이 매우 간단하고 비용이 크게 절감된다. PCR 기술은 이미 광범위하게 적용되어 점차 임상에 적용되었다.