독소 유형과 아미노산 서열지도.
전기 자극으로 얻은 독물의 양은 인공 자극보다 1 배가 많다. 성인 전갈 약 3000 마리는 6-7g 습독을 생산할 수 있고, 얼어서 1g 로 만들 수 있다. 즉, 밀리그램당 습독은 0. 14-0. 16 밀리그램의 건독으로 가공할 수 있다. 전갈마다 1 회 후에 0.34mg 정도의 건독을 생산할 수 있다. 수컷 전갈은 암전갈보다 작으며, 독도 암전갈보다 적다. 전기 펄스에 자극을 받으면 1 암전갈은 3 회 2.59mg 습독을 생성하고 1 전갈은 3 회 2.0 1mg 습독 (7 일마다 1 을 복용한다. 그러나 위생에 엄격히 주의를 기울여 독의 순도를 보장해야 한다. 개별 전갈은 한 번에 해독을 하지 않고 다시 전원을 켜야 하지만, 전기 시간은 2 초, 주파수는 128 Hz, 전압은 6 6- 10/0v 를 넘지 않아야 한다. 기구를 태워서 전갈을 손상시키지 않도록 해라. 전갈의 해독량은 온도에 따라 변한다. 온도가 낮을 때는 디톡스 비율이 적다. 온도가 20 C 이하일 때 전갈의 해독량은 상당히 적다. 전갈은10 C 이하일 때 해독을 멈춘다. 따라서 상온에서 전갈을 양식하려면 6 월 기온이 25 C 를 넘을 때 가능한 한 진행해야 한다. 임신 전갈과 씨앗 전갈은 독을 모으는 데 사용할 수 없다. 임신 초기의 전갈은 독을 채취할 수 있지만 출산하기 전에는 독을 채취할 수 없다. 독극물에 쓰이는 전갈은 대부분 상업 성인 전갈과 노인 전갈이다. 전갈독은 주로 단백질과 효소로 이루어져 있어 활성을 잃기 쉽다. 상온에서 변질되기 쉬우니, 반드시 건독가루로 가공해야 장기적으로 보존할 수 있다.
전갈독은 즉시 분리 정화에 쓰이는 것 외에 최대한 빨리 건조해야 한다. 전갈독 건조의 목적은 독액에서 수분을 최대한 제거하고 굵은 독액의 안정성을 높여 저장, 분석 및 판매를 용이하게 하는 것이다. 일반적으로 사용되는 건조 방법에는 두 가지가 있습니다. 하나는 진공냉동건조로 전갈독 중효소의 활성화를 유지하는 것입니다. 둘째, 독성을 유지하기 위해서라면 진공 건조를 이용할 수 있다.
(1) 진공건조 (즉 진공건조) 는 저압에서 전갈독 중의 수분을 빠르게 증발시키는 방법이다. 진공 건조 장치에는 진공 건조기, 응축관 및 진공 펌프가 포함됩니다. 건조기 맨 위 피스톤은 응축관을 연결하고, 응축관의 다른 쪽 끝은 흡입병, 건조탑, 진공펌프를 차례로 연결합니다. 증기는 응축관에서 응축되어 흡수병에 빠진다. 건조제 (예: 오산화 인 등). 전갈독 샘플과 건조기에 넣는다. 사용하기 전에 건조기 피스톤 주위에 바셀린을 조금 바르고 장치 전체에 기름이 새는지 확인합니다. 사용할 때는 전갈독과 건조제를 각각 평평한 그릇에 넣은 다음 건조기에 넣고 뚜껑이 움직이지 않을 때까지 진공 펌프를 켜서 피스톤과 진공 펌프를 차례로 끕니다. 전갈독이 말랐으면 천천히 피스톤을 풀어 공기가 전갈독 말린 가루를 흩어지지 않도록 해야 한다. 마지막으로 정화 조건 하에서 말린 가루를 꺼내서 즉시 포장하여 밀봉하여 보존한다.
(2) 진공 동결 건조: 먼저 전갈독을 저온 냉동기에 미리 얼려 고체 (독액이 스테인리스강 그릇에 담겨있음) 로 만든 다음 저온 고진공 상태에서 승화하여 순백색의 전갈독 말린 가루를 얻는다. 동결 건조는 저온 고진공 상태에서 이루어지기 때문에 독액은 물집이 생기지 않고, 벽에 달라붙지 않고, 느슨하고, 꺼내기 쉽고, 물에 잘 용해되어 보존에 유리하다. 전갈독의 분리순화 과정은 일반적으로 분자량별로 분리된 색보열을 통해 이온 교환기둥을 거쳐 역상 HPLC 기술을 통해 단일 팀을 얻는다. 프로그램은 먼저 CM-Sephadex C-50 이온 교환 크로마토 그래피로 분리 한 다음 Sephadex G-50 으로 필터링하거나 CM-Sephadex C-50, Sp-Sephadex C-25 이온 교환 컬럼 크로마토 그래피 및 SEPHADEX 를 사용하는 것입니다. CM-Sephadex C-50 으로 이온 교환층을 하면 독성이 강한 성분을 투석한 후 다시 층을 분석한 다음 Sephadex G-50 젤로 여과하면 독소를 정제할 수 있다. 또는 역상고효율액조색보법으로 동아집게 전갈독을 분리하고, 두 가지 다른 고효율 액조색보시스템으로 반복적으로 분리하고, 0. 1% 삼염화비산-물과 0. 1% 삼염화비산 -70% 에탄올-물 그라데이션으로 씻는다. 또는 2 차 추출, 즉 CM-Sephadex C-50 이온 교환 크로마토 그래피, 겔 여과, CM-Sephadex C- 10 탈염.
Sepharose FF 양이온 교환 젤기둥을 사용하면 순도가 높은 단일 유효 성분을 얻을 수 있을 것으로 예상된다. HPCE 와 고효율 액조색보법은 전갈독 중소분자 펩타이드의 구성과 상대적 함량을 잘 보여 주며 결과는 기본적으로 일치한다. 현재 전갈독을 분리 순수화하는 연구는 주로 각기 다른 기둥길이, 유속, 그라데이션의 젤색 스펙트럼과 고효율 액조색 스펙트럼을 선택해 항암 활성성이 높은 1 조 항암제를 얻는 데 초점을 맞추고 있다. 만약 3 단계 분석법으로 전갈독에서 항간질을 분리하고 그 N 단 50 아미노산 서열을 측정하고, 이온교환층층층층층층층분석과 젤저항층으로 조독에서 진통펩티드를 분리하고, 한 단계 CM Sephadex C-50 초장주와 저압 양이온 교환 기둥으로 조독에서 진통제를 순수화한다. 동아집게 전갈진통항종양 (AGAP) 은 동아집게 전갈독액에서 분리순화한 1 조 활성 펩티드로, 간단한 알칼리성 폴리펩티드로, 사슬이 단일이고 등전점이 10 보다 크다. 알칼리성 아미노산도 함유되어 있고 소수성 아미노산도 풍부하다. 활성 펩타이드 N 끝 부분의 아미노산 서열은 VRDGY IADDKNCAYF CGRNA YCDDE 입니다.
순도가 높은 단백질을 얻기 위해 젤 여과층층과 이온 교환층을 반복적으로 사용하지만, 이런 분리 방법의 단점은 샘플 손실률이 너무 높고 노동량이 많다는 것이다. 유전 공학 기술을 이용하여 전갈독 이성 단백질을 준비하는 연구가 진행 중이지만 비용이 많이 들고 수량이 제한되어 있다. 따라서, 전갈독의 분리는 여전히 전갈독 특이성 단백질의 주요 원천이다. 전갈독은 보통 냉장고 (1-4 C) 중 단기간에만 보관할 수 있다. 얼어서 결정가루가 되어야 생리활성을 유지할 수 있다. 전갈독 말린 가루의 안정성에 영향을 미치는 주요 요인은 수분, 공기, 온도이다. 건조 분말의 수분 함량이 10% 이하일 경우 미생물 활성을 억제할 수 있다. 수분 함량이 3% 미만이면 화학적 활성이 억제된다. 따라서 전갈독 말린 가루는 작은 병이나 시험관에 담아 용융봉이나 파라핀으로 밀봉하고 공기를 차단한 다음 저온 냉장고 (30 C) 에 보관해야 한다.
양식장에서 신선한 전갈독을 구매, 가공 또는 검사 부서에 운송할 때는 반드시 광구병과 얼음병 (병 안에 깨진 얼음이 있어 식혀야 함) 으로 휴대해야 한다. 전갈독 말린 가루를 먼 곳으로 운반한다면, 단백질 변성과 전갈독 활성화를 막기 위한 냉각 조치도 취해야 한다. 대부분의 동물성 한약의 유효 성분은 아직 분명하지 않거나 완전히 명확하지 않으며, 그것의 추출 순화 공예에 대한 연구도 매우 적다. 중성약의 생산 과정에서 동물류 한약은 기본적으로 생약 가루로 직접 만들어졌으며, 소수는 물, 알코올 추출, 물 알코올 정제로 만들어졌다. 동물 한약의 유효 성분은 대부분 단백질, 다당 등 대분자나 그 수분산물이기 때문에 통상적인 방법으로 이 대분자를 완전히 추출, 분리 및 순수화하기가 어렵다.
전통적으로 전갈독은 전갈가루로 약을 넣는 효과가 비교적 좋다. 이것도 임상적으로 많이 쓰이는 방법이다. 하지만 생가루의 양이 많아 위생 기준이 매우 슬펐다. 한편 대부분의 전갈은 생산지로 가공한 제품으로 약을 넣는다. 산지의 전갈가공은 일반적으로 물이나 소금물을 사용하지만, 이 두 가지 방법 모두 유효 성분의 손실과 변성, 품질을 통제하기 어렵고, 소금물 찜질은 소금 함량이 다르기 때문에 임상 사용량이 정확하지 않아 추가 사용을 제한하는 등 불합리한 점이 많다. 전갈 독소는 주로 분자 구조에 이황키가 함유되어 있는지 여부에 따라 분류된다. 그 중 하나는 약리적 특성에 따라 Na+ 채널, K+ 채널, Cl- 채널, Ca2+ 채널 (주로 골격근세포의 질막에 있음) 독소로 나뉜다. 이러한 이온 채널은 세포막 표면의 분자량이 큰 크로스막 당단백질로, 막에 특별한 친수공을 형성하며 세포 안팎 이온 교환의 경로이며 신경 근육 분비선 등 다양한 조직 세포막의 기본 흥분단위로서 전기 신호를 생성하고 전도할 수 있어 중요한 생리 기능을 가지고 있다.
나트륨 이온 채널
작용 방식과 결합 부위에 따라 나트륨 이온 채널 독소는 α-독소와 β-독소로 나눌 수 있다. 알파-독소는 전압 의존성 방식으로 Na+ 채널 3 부위에 작용하여 Na+ 채널의 비활성화 과정을 늦추고 Na+ 채널의 전류 감쇠를 늦추며 동작 전위 시간을 연장한다. 역할 목표에 따라 알파 독소는 4 가지 범주로 나눌 수 있다. ① 포유동물에게 고도의 특이성을 가진 전형적인 알파 독소, ② 곤충에 작용하는 곤충 알파 독소, ③ 중간형 알파 독소, 포유동물과 곤충에 동시에 작용하는 알파 독소는 비슷하다.
베타 독소는 Na+ 채널의 4 비트와 결합되어 Na+ 채널의 활성화 과정에 영향을 미치며 Na+ 채널의 전압 의존성 활성화 곡선을 음의 비트로 이동합니다. 곤충과 포유류 나트륨 채널의 특이성과 곤충에 작용할 때의 증상에 따라 항포유동물 베타 독소, 항곤충 흥분성 베타 독소, 항곤충 억제성 베타 독소와 TsVII 또는 전갈독소로 나뉜다. 포유류 전갈독소에 대항하여 포유동물에게 맹독이 있어 막집게 아래에서 포유동물의 뇌 속 나트륨 채널 전류를 조절할 수 있다. (윌리엄 셰익스피어, 햄릿, 독극물, 독극물, 독극물, 독극물, 독극물) 항충흥분독소는 포유동물 (예: 쥐 뇌) 에 주사해도 밀리그램급으로 독성이 없다. 항충 억제 독소는 주사를 통해 곤충 지연 마비를 유도할 수 있다. 패치 클램프 기술을 이용하여 항충은 독소를 억제하여 축돌기막 동작 전위를 강극화 방향으로 이동한다. 네 번째 베타-독소는 곤충과 포유동물의 나트륨 통로에 모두 높은 활성성을 가지고 있다. 예를 들어 Lqhβ 1 독소가 집파리 유충에 주사되는 것은 전형적인 억제 작용을 한다.
칼륨 채널
첫 번째는 Charybdotoxin(CTX) 으로 표기되며 분자에는 세 쌍의 이황 키가 있으며 쌍 패턴은 C 1-C4, C2-C5, C3-C6 입니다. 그러나 CTX 는 칼륨 이온 채널 아형에 대한 선택성이 낮아 널리 사용되고 있다. 1990 부터 ChTx 는 실험실 상품으로 개발되었습니다. 고전도 Ca2+ 활성화 K+ 채널 (BKCa), 전압 의존성 K+ 채널 (예: 림프세포와 초파리의 Shaker K+ 채널), A 형 K+ 채널 (난모세포) 및 작은 컨덕턴스 Ca2+ 활성화 K+ 채널 ( 그것의 특징은 N 끝이 코크스 글루타민산 잔기, 70% 의 아미노산 서열 유사성, 보수적인 Phe 와 Trp 잔기가 각각 분자의 2 위와 14 위에 있다는 점이다. 비슷한 독소는 CTX-Lq2, 1beriotoxin( 1bTX), BmTX, PBTX 도 있습니다.
두 번째 부류는 noxistoxin(NTX) 으로 멕시코 Centruroides noxius 전갈독소에서 처음으로 분리되었으며, 5 종의 전갈독에서 분리된 8 종의 텅스텐도 처음으로 보도된 전갈칼륨 채널 차단제이다. 주로 전압 의존성 K+ 채널에 작용하여 동작 전위 기간을 연장하고 Ca2+ 활성화 K+ 채널 (KCa) 에 약한 억제 작용을 합니다. 이런 독소는 1 종 전갈독소와 80% 의 아미노산 서열과 비슷하지만 40% 의 유사성만 있다. NTx 는 squid 축돌기 샘플의 지연 정류 칼륨 채널, 다람쥐 골격근 샘플의 BKCa, 인간 T 림프세포의 전압 의존성 칼륨 채널을 가역적으로 차단하고 복용량 의존성을 나타낼 수 있다. 비슷한 독소는 MgTX, CoTX 1, CITX, TsKa, HTX 도 있습니다.
세 번째 범주는 Kaliotoxin(KTX) 으로 북아프리카 전갈 독인 Androctonus Martetanicus Mauretanicus 에서 처음으로 분리되었으며, 7 종의 전갈 독에서 정제된 9 개의 펩타이드 세그먼트는 37-38 개의 아미노산 잔기로 구성되어 있다. 이런 독소는 80 ~ 90% 의 아미노산 서열 유사성을 가지고 있으며, 1, 2 종에 비해 40 ~ 50% 의 유사성을 가지고 있다. 고전도 Ca2+ 활성화 K+ 채널 (BKCa) 을 포함한 전압 의존성 칼륨 채널을 차단합니다. 비슷한 독소로는 Ag-itoxin 2(AgTX 2), AeTX 3, KTX 2 및 KTX 3 이 있습니다.
네 번째 범주는 LTX 1, P05, BmP05 로 대표되며 모두 3 1 개 아미노산 잔기로 구성되며 아미노산 서열 유사성은 84% 입니다. 그들은 쥐에게 독성이 매우 크며, 뇌실 주사의 치사량은 2μg/kg 보다 적다. 이들은 apamin 과 경쟁하여 쥐의 시냅스 막에 있는 apamin 수용체와 결합할 수 있으며, 다른 세포 유형에서 apamin 에 민감한 칼륨 채널 (저전도, Ca2+ 활성화, Ca2+ 활성화, APAMIN 에 민감한 K+ 채널, SKCa) 을 특이하게 차단할 수 있습니다.
다섯 번째 범주는 TSK 독소로, 브라질에서 생산되는 전갈티오스 serru-latus 독소에서 분리된 35 펩티드로, C 의 끝에 독특한 -Cys-Asp-Cys- 트리 펩타이드 구조를 함유하고 있다. Apamin 에 민감한 작은 컨덕턴스 Ca2+ 에 의해 활성화되는 K+ 채널 (SKCa) 에 특이하게 작용합니다. RodriguesAR 와 같은 학자들은 TsTX-Ka 가 두꺼비 난모세포의 Kvl.3 채널 (Shaker K+ 채널의 아형) 을 차단하여 친화력과 가역성이 높다는 사실을 발견했다.
여섯 번째 범주는 MTX(Mauxotoxin) 로, 북아프리카의 전갈인 maurus toxin 에서 분리되어 있는데, 여기에는 세 개의 전갈독에서 분리된 다섯 가지 폴리펩티드가 포함되어 있으며, 크기는 34 개에서 37 개의 아미노산 잔기가 다르다. MTX 분자에는 C 1-C4, C2-C5, C3-C6, C7 등 다른 독소와 다른 4 쌍의 이황키가 포함되어 있습니다. 다른 매칭 방법은 C 1-C5, C2-C6, C3-C7, C4-C8 입니다. 파리류의 ShakerK+ 채널, Apamin 또는 KTX 민감성 K+ 채널과 같은 전압 의존성 K+ 채널을 차단할 수 있습니다. 비슷한 독소에는 Pi 1, HTX 1, Pi4 등이 있습니다.
일곱 번째 그룹은 P0 1 으로 대표되며, 28-29 개의 잔기로 이루어져 있는데, 여기에는 세 개의 전갈독에서 분리된 네 가지 플루토늄이 포함되어 있다. 지금까지 발견된 가장 작은 전갈독소 그룹으로 아미노산 서열 유사성 76% 입니다. 주로 apamin 에 민감한 작은 컨덕턴스 Ca2+ 활성화 K+ 채널 (SKCa) 에 작용하지만 상대적으로 결합 능력이 약합니다. 쥐에 대한 독성이 매우 크다. 따라서 이 네 가지 플루토늄은 구조가 비슷하기 때문에 칼륨 채널 독소로 분류되지만 주요 기능은 아직 탐구해야 한다. 비슷한 독소에는 BmP0 1 LPII 도 있습니다.
여덟 번째 범주는 BmP02 로 표시되며, 두 전갈독에서 분리된 세 가지 폴리펩티드 (BmP02, BmP03, LP 1) 를 포함합니다. 중국 동아집게 전갈독에서 분리된 28 개의 폴리펩티드는 3 쌍의 이황 결합을 함유하고 있으며 아미노산 서열은 1 잔기가 다르다. Apamin 에 민감한 작은 컨덕턴스 Ca2+ 에 의해 활성화되는 K+ 채널 (SKCa) 의 작용이 미약하여 쥐에게 치사독성이 없다. 더 많은 연구에 따르면 BmP02 는 토끼 심근세포의 순간 외향 칼륨 이온 전류를 약화시킬 수 있으므로 BmP02 는 순간 외향 칼륨 이온 채널을 연구하는 도구로 사용될 수 있다.
아홉 번째 범주는 BTK-2 로 대표되는 K+ 채널 차단제로 인도 전갈의 굵은 독액에서 분리되었다. 그것은 32 개의 아미노산이 6 개의 보수적인 시스틴을 통해 교차되어 분자량이 3452Da 로 되어 있다. BTK-2 는 다른 K+ 채널 차단제와 40 ~ 70% 의 시퀀스 유사성을 가지고 있습니다.
물론, 이 그룹화는 절대적이지 않다. 각종 독소는 구조적으로 겹친다. 특히 생물학적 활성에서는 더욱 그렇다. 예를 들어, CTX 는 BKCa 뿐만 아니라 림프세포의 Kv, 초파리 흔들침상의 Kv, 발톱두꺼비 난모세포가 표현하는 A 채널 (KA) 과 바다토끼의 SKCa 에도 작용한다. NTX 는 Kv 를 억제할 뿐만 아니라 칼슘 활성화 칼륨 채널 (KCa) 을 약하게 억제한다. MTX 는 shaker 칼륨 채널뿐만 아니라 apamin 과 KTX 와 다람쥐 뇌시냅스막의 결합도 억제한다.
칼슘 통로
두 가지 독소, 즉 IpTxA 와 Maurocalcine 은 전갈 Pandinus imperator 와 전갈 maurus palmatus 의 굵은 독소에서 분리되었다. 둘 다 33 개의 아미노산 잔기로 이루어져 있는데, 분자 중 3 쌍의 이황 결합으로 동원성이 82% 이다. 쥐의 LD50 은 20μg/ 쥐로 근육형 라니틴 수용체 (RyRtype 1) 에 역효과를 낼 수 있다.
칼슘 채널 독소는 알칼리성 잔기가 풍부해 세포막에 음전하를 띠는 지방산 분자와 결합해 지질 이중층을 파괴하고 막 안으로 들어가 세포 내 레니틴 수용체와 상호 작용할 수 있다. RyRs 와 결합된 분자 메커니즘은 디 히드 록시 피리 미딘 수용체의 II-III 링과 동일하며 Rryanodine 수용체와의 상호 작용을 통해 내질망에서 Ca2+ 의 방출을 활성화합니다.
염소 이온 통로
염소 채널 독소는 전갈독에서 젤 여과와 HPLC 분리를 통해 정제된 폴리펩티드이다. 신경교종에 대한 특이성 염소 채널 (GCC) 에는 특이성 친화력이 있어 정상 뇌 조직에는 없다. 분자량은 4070 으로 이황결합 4 개와 아미노산 잔기 36 개가 있다. 유사 독소에는 BeI 1, BeI5, AmmP2 등이 있습니다. 염소 독소는 원발성 신경교종의 침범과 전이를 억제할 수 있다. 표적은 포유류독소 (MTx, 함량이 10%-50%), 척추동물독소, 곤충독소, 즉 항충전갈독소 (ITx, 함량이 1% 미만) 와 갑각류신경으로 나뉜다 분류는 전갈독 폴리펩티드를 다른 실험동물 (예: 쥐, 마파리, 집파리, 등족류 갑각류) 에 주사하거나 다른 격리동물이나 샘플에 주사하는 독성 반응에 따라 분류된다. 약리와 전기 생리작용에 따르면 포유동물 독소는 α와 베타의 두 종류로 나눌 수 있다. 알파 독소는 세포막에서 나트륨 이온 채널의 비활성화를 억제하여 나트륨 전류를 감소시키고, 동작 전위 기간이 현저히 연장되고, 베타 독소는 주로 나트륨 채널의 활성화에 영향을 주며, 전압 의존성 나트륨 활성화 곡선을 음의 막 전위로 이동합니다. 즉 탈극화로 인한 흥분효과입니다. 그러나 기존 연구에 따르면 MTx 와 CTx 의 정의는 엄격하고 명확하지 않습니다. MTx 와 CTx 는 세 가지 동물에 대해 독성이 다르지만 포유류와 갑각류의 마비작용에 더 민감하며 ITx 의 정의는 비교적 합리적이다.
197 1 년, Zlotkin 등은 아프리카 전갈 Androctons australis 에서 전갈독소 Aa IT 를 정화하는 데 앞장서 항충전갈독소의 감정 방법을 확립했다. 이 방법은 마파리 유충을 감정 재료로 사용했고, 나중에는 집파리, 바퀴벌레, 메뚜기 등 곤충도 사용했다. 동작효과에 따라 빠른 수축마비 효과의 CP 형과 곤충근육을 천천히 풀어서 완전히 마비된 FP 형으로 나눌 수 있다.
수용체 부위와 전기 생리효과의 분류에 따라 ITx 는 흥분형, 억제형, α로 더 나눌 수 있습니까? A 형과 B 형은 물론 항충 전갈독소에도 포유동물 (또는 갑각동물) 과 곤충에 독성이 있는 독소가 있지만, 이들 중 일부는 곤충에 대한 독성이 포유류에 대한 독성보다 훨씬 크다.