PCR 기술의 원리: DNA 중합 효소를 사용하여 적절한 온도에서 두 개의 DNA 템플릿을 분리한 다음, 템플릿 DNA 의 양쪽 끝에서 유도하는 프라이머의 작용으로 DNA 중합 효소의 촉매 작용을 통해 프라이머와 템플릿 DNA 의 단일 가닥을 보완해 각 프라이머의 5' 끝이 새로운 DNA 사슬을 합성하고 결국 두 개의 새로운 DNA 분자를 얻을 수 있게 한다. (윌리엄 셰익스피어, DNA, DNA, DNA, DNA, DNA, DNA, DNA, DNA)

첫째, PCR 기능

PCR 은 DNA 가 체외 95 C 에서 변성하여 단일 사슬이 되었다는 사실에 기반을 두고 있다. 저온에서 (보통 60 C 안팎) 프라이머와 단일 체인은 염기 상보성 페어링 원리에 따라 결합한 다음 온도를 DNA 중합 효소의 최적 반응 온도 (약 72 C) 로 조절하고 DNA 중합 효소는 인산에서 오당 (5'-3') 방향으로 상보체인을 합성한다.

중합 효소를 기반으로 한 PCR 기기는 사실 트랜스젠더 온도, 리 폴딩 온도 및 확장 온도를 잘 조절할 수 있는 온도 조절 장치이다. PCR 기술의 기본 원리는 DNA 의 자연 복제 과정과 유사하며, 그 특이성은 과녁 시퀀스의 양끝과 상호 보완되는 과뉴클레오티드 프라이머에 의존한다.

둘째, PCR 반응의 다섯 가지 요소

PCR 반응의 다섯 가지 요소: PCR 반응에 참여하는 물질은 크게 다섯 가지가 있는데, 프라이머 (PCR 프라이머는 DNA 조각이고, DNA 가 세포 내에서 복제하는 프라이머는 RNA 체인), 효소, dNTP, 템플릿, 완충액 (Mg2+ 필요) 입니다. 유인물의 설계 방법은 여러 가지가 있는데, 실험에서 PCR 의 목적에 따라 결정되지만, 기본 원리는 같다.

Pcr 기술에 대한 순환 매개변수:

1, 예변성

템플릿 DNA 의 완전 변성과 PCR 효소의 완전 활성화는 PCR 의 성공에 매우 중요하다. 가열 시간 참조 시약 설명에 따르면 수정되지 않은 Taq 효소의 활성화 시간은 일반적으로 2 분입니다. -응?

2, 변성 단계

보통 95 C 30 초면 순환중의 각종 표적 DNA 서열을 완전히 변성시킬 수 있으며, 가능하다면 이 단계의 시간을 단축할 수 있다. 트랜스젠더 시간이 너무 길면 효소 활성이 손상되고, 너무 짧은 목표서열의 트랜스젠더가 철저하지 않아 증폭에 실패하기 쉽다.

프라이머 어닐링

어닐링 온도는 여러면에서 결정되어야합니다. 일반적으로 유인물의 Tm 값에 따라 증폭 길이에 따라 어닐링 온도를 적당히 낮춘다. 그런 다음이 실험을 바탕으로 추정을하십시오. 어닐링 온도는 PCR 의 특이성에 큰 영향을 미친다.