1 RFLP: 이 기술은 1974 년 Grodzicker 에 의해 설립되었습니다. 특정 생물 유형의 게놈 DNA 가 어떤 제한적인 내체효소에 의해 완전히 소화되면 분자량이 다른 동원등위 유전자 조각이 생성되거나, RFLP 표기 기술의 기본 원리는 전기 영동을 통해 효소 분해 부위의 돌연변이를 일으킬 수 있는 돌연변이를 검출하는 것이다. (알버트 아인슈타인, Northern Exposure (미국 TV 드라마), 동물명언) 예를 들어, 점 돌연변이 (효소 절단 부위의 신세대와 제거) 와 DNA 의 재조합 (삽입 및 누락으로 인한 효소 절단 부위 사이의 길이 변화 등) 은 효소 절단 등위 유전자의 변화로 인해 RFLP 가 발생할 수 있습니다. 이 기술은 다음과 같은 기본 단계를 포함합니다: DNA 추출; 효소 소화는 DNA 로 제한됩니다. 겔 전기 영동에 의한 제한 단편의 분리; 이 조각들을 원래의 순서와 위치에 따라 조작하기 쉬운 여과막으로 옮깁니다. 방사성 동위원소 또는 비방사성 물질로 표시된 DNA 를 프로브와 막의 DNA 교배 (Southern 교배) 로 사용합니다. 방사선 자체 현상 또는 효소 검사는 프로브의 제한된 세그먼트에서 다양한 재료가 다형성을 가지고 있음을 보여줍니다.
RFLP 마크의 주요 특징은 (1) 이 전체 게놈에 분포되어 거의 무제한이라는 것입니다. (2) 표현형 효과 없음, 발육 단계 및 장기 특이성의 제한 없음; (3)*** 명시 적으로, 순수 접합체와 이합체를 구별 할 수있다; (4) 결과는 안정적이고 신뢰할 수 있습니다. (5)DNA 는 수요가 많고, 검출 기술이 복잡하여 대규모 육종 실천에 사용하기가 어렵다.
2 RAPD: Williams = 1990 에 의해 창립되었으며, 기본 원칙은 PCR 기술과 일치합니다.
PCR 기술은 체외에서 특정 유전자나 DNA 서열을 빠르게 증폭시키는 방법이다. Mullis 는 시험관에 처음으로 반응 시스템을 구축했다. 몇 시간 후, 아주 적은 수의 표적 유전자나 특정 DNA 조각이 수백만 배나 증가할 수 있다. 그 원리는 세포의 DNA 복제 과정과 비슷하다. 첫째, 끓는점에 가까운 온도에서 가열하면 이중 가닥 DNA 분자가 두 개의 단일 가닥 DNA 분자로 분리됩니다. 그런 다음 DNA 중합 효소는 단일 가닥 DNA 를 템플릿으로 반응 혼합물에 있는 네 가지 디옥시리보 삼인산 (dNTPs) 을 이용하여 새로운 보완 DNA 체인을 합성한다. 위의 프로세스는 루프이며, 각 루프의 산물은 다음 루프의 템플릿으로 사용될 수 있습니다. 20-30 개의 순환을 거친 후, 두 프라이머 사이의 특이성 DNA 조각은 기하급수적으로 복제할 수 있다.
RAPD 마커 기술은 무작위로 게놈 DNA 를 1 개 (때로는 2 개) 무작위 프라이머 (보통 8- 10 개 염기) 로 무작위로 증강시킨 다음 젤전기 영동으로 증강된 유전물질의 게놈 DNA 를 분리하는 것이다. 특정 프라이머 결합 영역에서 DNA 조각이 누락되거나 염기 돌연변이가 발생하면 프라이머 결합 부위 분포가 그에 따라 변경되어 PCR 제품이 증가하거나 누락되거나 분자량이 변경될 수 있습니다. PCR 제품이 증가하거나 부족하면 RAPD 플래그가 생성됩니다.
RAPD 마크의 주요 특징은 (1) DNA 프로브가 필요하지 않고, 유인물을 설계하기 위해 시퀀스 정보가 필요하지 않다는 것입니다. (2) 우성 유전 (극소수 * * * 우성), 잡합자와 순합자를 구분할 수 없다. (3) 기술은 간단하고 분자 혼성화 및 방사선 자체 개발을 포함하지 않는다. (4)4)DNA 샘플 수요가 적고, 유인물 가격이 저렴하고, 비용이 저렴합니다. (5) 실험 반복성이 좋지 않아 결과 신뢰성이 낮다.
3 AFLP:Zabeau 와 Vos 가 1993 에서 발명한 AFLP 마커는 게놈 DNA 제한 단편의 선택적 증폭에 의해 생성된 증강산물의 다형성으로, 그 특성도 제한 내체효소 조각의 길이 다형성을 보여 주지만, 이 다형성은 증강조각 길이의 차이에 따라 감지된다. 이 기술은 RFLP 의 안정성과 PCR 기술의 단순성과 효율성을 결합합니다. RFLP 밴드와 RAPD 기술의 불안정한 단점을 극복할 수 있습니다. 기본 기술 원리와 운영 절차는 다음과 같습니다. 먼저 제한 효소로 게놈 DNA 를 소화하여 다양한 크기의 무작위 제한 조각을 만듭니다. 그런 다음 이 세그먼트의 양쪽 끝을 특이성 과뉴클레오티드 커넥터와 연결합니다. 그런 다음 커넥터 시퀀스에 따라 프라이머를 설계합니다. 제한 단편이 너무 많기 때문에 증강된 모든 산물은 젤에서 분리하기 어렵다. 따라서 프라이머의 세 번째 끝에 1-3 개의 선택적 염기를 추가하여 선택적 염기와 쌍을 이룰 수 있는 조각만 프라이머와 결합하여 템플릿으로 증폭할 수 있도록 합니다. 마지막으로, 폴리아크릴 젤전기 영동으로 이러한 특이성 증강산물을 분리한다.
AFLP 마크의 주요 특징은 (1) AFLP 분석에 사용할 수 있는 제한 내체효소와 선택적 염기 유형이 많기 때문에 이 기술에서 생성되는 마커 수는 무한합니다. (2) 일반적인 AFLP 분석, 각 반응 생성물의 밴드는 50- 100 사이이므로 한 번의 분석으로 여러 부위를 동시에 감지할 수 있으며 다형성이 매우 높습니다. (3) * * 명시 적, 전형적인 멘델 유전; (4) 높은 해상도, 신뢰할 수있는 결과; (5) 현재 이 기술은 특허로 보호되고 있으며 분석용 테스트 키트 가격이 비싸고 실험 조건이 까다롭다.
4 SSR(SSLP): SSR 또는 마이크로위성 DNA, Moore 가 199 1 에서 발견한 것은 여러 종류 (대부분/kloc-0) 입니다 (CA)n(AT)n(GGC)n 과 같이, 서로 다른 유전 물질 반복 횟수의 다변화로 인해 SSR 길이의 높은 변동성이 발생합니다. 이것이 SSR 마크의 기초입니다. 마이크로위성 DNA 는 전체 게놈의 다른 위치에 분포되어 있지만 양쪽 끝은 보수적인 단일 복사 시퀀스로, 이 양끝의 순서에 따라 한 쌍의 특이성 유인물을 설계하고 PCR 기술을 통해 그 사이의 핵심 마이크로위성 DNA 서열을 증폭시켜 전기 수영 분석 기술을 통해 길이 다태성을 얻을 수 있다.
SSR 마크의 주요 특징은 (1) 이 풍부하고 전체 게놈에 광범위하게 분포되어 있다는 것입니다. (2) 대립 유전자 변이가 많다. (3)*** 우성 표기는 잡합자와 순합자를 식별할 수 있다. (4) 실험은 반복성이 좋고 결과는 믿을 만하다. (5) 새 레이블을 만들 때 반복 시퀀스의 양쪽 끝에 있는 시퀀스 정보를 알아야 하기 때문에 개발하기 어렵고 비용이 많이 듭니다.