식물성 기름 체단백질의 표현과 순수화 시스템 연구.

식물성 기름 발현 시스템 연구 진행

그리고 지아 * *

중국 농업과학원 생명기술연구소, 베이징 10008 1.

식물 종자에서 유질단백질의 구조적 특징과 코딩 유전자의 조절을 소개하고 식물성 기름체 표현 시스템인 신형 식물생물반응기를 이용한 목적단백질 생산의 연구 진척과 전망을 설명했다.

키워드: 오일 바디; 오일 단백질 표현 시스템 식물 생물 반응기; 표적 단백질

기존의 외원 유전자 표현 시스템은 주로 세균, 실크 곰팡이, 효모, 포유류 세포, 동물 유방, 곤충 (곤충 세포, 곤충 막대 바이러스, 곤충 전체) 및 식물 표현 시스템 (식물 전체, 바이러스 벡터, 오일) 을 포함한다. 이러한 외원 유전자 표현 시스템은 표현량, 표현산물의 분리순화, 활성, 비용 등에 각각 장단점이 있다. 최근 몇 년간의 연구 진척을 보면 식물 표현 시스템이 다양한 목적의 단백질을 대규모로 생산하는 것은 여전히 여러 가지 요인에 의해 제한되고 있는데, 그중에서도 표현 수준이 낮고 순화 비용이 높은 것이 주요 제한 요인이다. 식물성 오일 체표현 시스템은 목적단백질의 코드화된 유전자를 유질단백질 코드화 유전자의 3' 단에 삽입하고, 유질단백질 시동기를 이용하여 목적단백질과 유질단백질을 유전자 변형 식물의 유체에서 특이적으로 표현한다. 유전자 변형 식물의 씨앗을 얻은 후 씨앗을 산산조각 내고, 원심분리유상과 수상을 분리하고, 상층유체 부분을 회수하면, 씨앗의 대부분의 비목적 성분을 제거하여 최근 몇 년간 목적단백질의 분리순화 비용을 현저히 낮출 수 있다. 새로운 식물 생물 반응기로서 유전자 변형 식물이 결국 외원 단백질을 생산할 수 있는 새로운 방법을 제공한다.

1 오일

식물 씨앗에 저장된 영양소는 주로 단백질, 지방, 탄수화물을 포함한다. 지방류는 일반적으로 세라미드 글리세린 (tag) 형태로 존재한다. 호호바는 제외하고 왁스 에스테르를 저장한다. 씨앗의 라벨 분자는 서로 수렴하지 않고, 여러 개의 작고 안정적인 아세포 방울로 흩어져 있는데, 이를 기름체라고 한다. 유체는 생물 체내에서 가장 작은 세포기로서 그 자체의 구조와 특징을 가지고 있다.

1..1오일 크기

오일은 구형으로 직경 0.5 ~ 2.5 μ m 로 식물 종류에 따라 크기가 다르며 영양과 환경에 영향을 받습니다. 같은 씨앗이라도 조직마다 기름의 크기가 다르다. 생물학적 관점에서 볼 때, 기름의 크기는 주로 두 가지 요인에 의해 결정된다: (1) 씨앗이 싹트면 지방효소에 의해 촉발되는 tag 에 가장 큰 표면을 제공한다. (2) 가장 적게 소비되는 오일 단백질과 인지질, pl). 오일 지름이 0.2μm 미만이면 리파아제 촉매에 더 큰 표면을 제공할 수 있지만 대량의 pl 과 유질단백질이 필요합니다. 반면 유체 지름이 2.5μm 보다 크면 pl 과 유질단백질의 양은 절약되지만 표면적이 작기 때문에 지방효소는 씨앗이 싹트고 새싹이 자라는 과정에서 빠르게 수분류를 가수 분해하여 식물 성장에 필요한 에너지를 제공할 수 없다. (데이비드 아셀, Northern Exposure (미국 TV 드라마), 기름명언)

1.2 오일 성분

오일의 구성은 (1)92%-98% 중성 지질, tag 위주로 약 95%, 소량의 다이글리세린 (Dag) 과 유리지방산을 포함한다. (2) 1%-4% 인지질 (pl): 주로 포스파티딜콜린으로 약 60%-70% 를 차지하며 소량의 포스파티딜세린, 포스파티딜에탄올, 포스파티딜이노시톨 등이 있습니다. (3) 1%-4% 유체단백질: 그 중 90% 는 유질단백질이고, 소량은 caleosin 과 시토크롬 C 복원효소입니다. 지방효소와 아세틸 지방효소는 여전히 모시마나 콩과 같은 일부 식물의 성숙한 씨앗의 유막에 존재한다. 꽃가루 알갱이 기름에서는 유질단백질이 검출되지 않았고, 올리브와 아보카도 열매의 피질유에서도 유질단백질이 검출되지 않았다. 이 오일 중의 지질은 장기 저장에 사용되지 않기 때문에 Murphy 와 vance 는 유질단백질이 장기를 저장하는 유체에 고유할 수 있다고 제안했지만 N? Sted 등은 유질단백질이 정상유 체내에 존재한다는 것을 발견했다.

1.3 오일 기본 구조

Tzen 등이 제시한 오일 구조 모델에 따르면 오일 내부는 액체 라벨로, 외부는 단일 인지질 분자와 그 상감 단백질-유질단백질로 구성된 반셀막이다. 이 반단위막의 기본 단위는 13 개의 pl 분자와 1 개의 유질단백질 분자로 구성되어 있다 (그림 1). Pl 은 유면의 80% 를 차지하고 나머지 20% 는 유질단백질이다. 각 pl 분자의 두 개의 소수성 세라미드는 내부 소수성의 라벨 기질을 마주하고 라벨 분자와 상호 작용합니다. Pl 친수성 헤드 기반은 세포질에 직면 해있다. 유질단백질 분자 중간의 소수성 영역은 약 1 1nm 의 손잡이 구조를 형성하여 유질단백질 분자의 2/5 를 차지하며 pl 의 소수성 아실 부분과 오일 체내의 라벨로 확장됩니다. 이 부분은 68 ~ 74 개의 아미노산으로 구성된 머리핀 구조이고, 머리핀 구조의 꼭대기에는 세 개의 프롤린과 한 개의 세린으로 구성된' 프롤린 매듭' (그림 1) 이 있다. 나머지 3/5 부분은 유질단백질 분자가 유체 표면을 덮고, 외부 레시틴이 레시틴 반셀막에 작용하는 것을 막는다. 등전초점 결과, 오일의 등전점은 5.7-6.6, 즉 ph 값이 중성일 때 유체 표면에 음전기가 있는 것으로 나타났다. 식물 씨앗이 장기간 저장된 후, 유체 구조는 안정적으로 유지되어 서로 수렴하지 않는다. 일반적으로 유체 표면 전하와 유질단백질의 존재는 유체 구조의 안정을 유지하는 주요 요인으로 여겨진다. 최근 연구결과에 따르면 유체 표면에는 주로 유질단백질과 소량의 다른 단백질 (예: caleosin) 이 박혀 있어 식물에서 가장 작은 세포기로서 그 구조가 상술한 모델보다 더 복잡할 수 있다. 유질단백질과 caleosin 은 현재 연구된 두 가지 유체단백질이다.

2 오일 단백질

2. 1 oelosin 및 그 구조적 특징

유질단백질은 원래 겨자에서 발견되었다. 현재 참깨, 유채, 해바라기, 당근, 옥수수, 콩, 의남, 목화와 같은 많은 식물의 유질 단백질의 유전자 서열 및 아미노산 서열이 이미 보도되었다. 유질단백질은 매우 소수성이 높은 알칼리성 소분자량 단백질로 분자량은 15-26kd 로 주로 씨앗에서 표현된다. Oelosin 은 일반적으로 오일 특유의 것으로 여겨진다. 최근 오일 근처 내질망에서 약 5% 의 oelosin 이 발견됐고, 뿌리끝 오일체에서도 발견됐다. Oelosin 은 내질망에서 합성되어 내질망과 결합된 리보당체에 의해 합성된다. 유질단백질은 유체 표면에 박혀 있어 유체의 안정을 유지하는 데 매우 중요하다. 한편으로는 공간적으로 유체 분자 간의 중합을 방해하는 반면, 유질단백질은 씨앗이 발아할 때 지방효소와 유체의 결합점으로 여겨진다. 어떤 식물에서 가장 함량이 높은 유질단백질의 항체 역시 십자화과 19-20kd, 국화과 20kd, 콩과 24kd 와 같은 분자량과 비슷한 유질단백질을 식별할 수 있다. 뿐만 아니라, 서로 다른 주체 사이의 유질단백질도 이런 상호 작용을 할 수 있다.

서로 다른 식물에서 온 유질단백질은 같은 구조적 특징을 가지고 있으며, 모두 세 가지 기본 도메인, 즉 (1)n- 끝에 40-60 개의 아미노산으로 구성된 양친성 영역 (친수성과 친지) 을 가지고 있다. 이 지역은 유체가 세포질을 향하는 쪽에 분포되어 있다. (2) 중간에 68 ~ 74 개의 아미노산으로 구성된 고도의 소수성 영역. 이 지역의 아미노산 잔기의 극성 분포에 따르면, tzen 과 Huang 은 tag 매트릭스로 확장되는 반식 평행 β-접기 구조라고 추측하며, 맨 위에는 3 개의 프롤린과 1 개의 세린으로 구성된' 프롤린 매듭' 이 있다. 이 지역, 특히' 프롤린 매듭' 은 서로 다른 출처의 유질단백질에서 매우 보수적이기 때문에 진화의 관점에서 식물에 큰 의미가 있을 수 있다. (3)C- 끝 33-40 개의 아미노산이 α-나선 도메인을 구성한다. 이 도메인은 친수친유로, 양전하를 띤 기단이 pl 층에 음전하를 띠는 부분 (레시틴, 레시틴, 유리지방산 등) 을 마주하고 있다. ), 음전기가 있는 부분은 유면을 향합니다 (그림 2). 각 유질단백질 분자에 대해 약 20% 의 아미노산 잔기가 pl 층에 박혀 있고, 30% 는 tag 에 스며들고, 나머지 50% 는 기름 표면에 노출된다. 유질단백질 2 차 구조의 생화학 분석은 플루토늄의 모형을 지지한다. Lacey 등은 새로운 유질단백질 2 차 구조 모델을 제시했다. 즉, 유질단백질 중간의 소수성 영역은' 프롤린 매듭' 으로 연결된 두 개의 독립적인 알파-나선형 구조이며, 이' 프롤린 매듭' 은 180 도의 회전각을 형성한다. N 끝은 β 접힘 구조이다. C 끝은 친수친유의 알파 나선형 구조이며, 이 두 모형은 더 많은 실험 검증이 필요하다.

2.2 오일 단백질 유전자 및 그 발현 조절

알몸 식물에는 단 하나의 유질단백질이 있는 것으로 밝혀졌는데, 이불식물의 유질단백질 유전자는 종종 유전자 가족으로 존재하며, 한 식물에는 여러 가지 유질단백질 이성질체 (표 1) 가 자주 존재한다. 각 이종체는 식물에서의 표현량, 부위, 속도가 모두 다르다. 옥수수에서 18kd 유질단백질의 표현량은 16kd 의 18%-20% 에 불과하고, 유채씨유에서 20kd 유질단백질의 표현량은 20KLOC 에 불과하다.

오일 단백질 유전자 발현 조절 특성;

(1) 유질단백질 유전자는 주로 발육에 의해 조절되며 씨앗이 익는 동안 표현된다. 유질단백질 유전자는 수분강압, 재스민산, ABA 및 삼투안정제 (예: 소르비톨) 에 의해 유도된다. 예를 들어, ABA 유도 유채에서 20k 여홍유전자 이후 0 ~ 4 시간 동안 mrna 와 단백질의 축적이 감지됐다. 삼투안정제 (예: 소르비톨) 로 65438±0h 를 처리한 후 mrna, 3-6h 가 유질단백질의 축적을 감지했다. Abre(aba-responsive element) 기본 순서 시퀀스 (t/c acgtggc) 는 유채와 의남 의유질단백질 유전자의 시동영역에 존재하며, ABA 특이에 의해 유도된다. (2) 유질단백질 유전자의 표현은 조직특이성을 가지고 있으며, 주로 씨앗의 배아 (방패형과 하배축) 와 분말층에서 표현된다. De-oliveira 와 Robert 등은 꽃가루에서 특수한 유형의 유질단백질이 발견되었다고 보도했다. 유채 포자 배양에서 나온 구형 배아와 하트 배아에서 모두 20kd 의 유질단백질을 감지할 수 있고, 하트 배아에서도 상응하는 mrna 를 감지할 수 있어 유질단백질이 씨앗 발육 초기에 발현된다는 것을 알 수 있다. (3) 유질단백질 유전자의 5' 상층부에는 벼유질단백질 유전자 상층부에 있는 곡물 저장단백질 유전자의 조절요소 catgcang 과 같은 다른 조절 서열도 있다. 유채유질단백질 프로모터에 존재하는 aatgcatg 서열은 콩과 유전자 씨앗의 특이성 표현을 제어하는 보수 서열 ry 기순서열 (catgcatg) 과 고도의 동족이다. CACACA (Caca(taacaca) 서열은 의남 의유질단백질 유전자의 시동자에 존재하며 콩과 식물 씨앗단백질에서 흔히 볼 수 있는 서열이다. (4) 유질단백질 유전자는 조직 특이성으로 표현되지만, 그 5' 끝에는 신호펩티드 서열이 없고 그에 따라 N- 끝에도 신호서열이 없다. 유질단백질 유전자 내부에 약간의 서열이 있을 수도 있고, 유질단백질이 어떤 형태를 형성하여 유질단백질 중간 부분의 누락과 같이 유체에서의 위치에 심각한 영향을 미칠 수 있다고 추정한다. 그 N 단이나 C 측의 결핍은 거의 영향을 주지 않거나 전혀 영향을 주지 않는다. (알버트 아인슈타인, Northern Exposure (미국 TV 드라마), 기름명언) "프롤린 매듭" 의 세 가지 프롤린 돌연변이가 류닌으로 변한 실험에 따르면, "프롤린 매듭" 은 유질단백질이 오일 체내에 위치시키는 데 필요한 것으로 드러났다. 유질단백질 중간의 소수성 영역은 유질단백질 내질망의 위치신호일 수 있지만, 체외에서' 프롤린 매듭' 의 돌연변이는 유질단백질 내질망의 위치에 영향을 주지 않는다.

2.3 caleosin

다양한 식물성 오일 체단백질을 다양한 방법으로 분리했는데, 유질단백질 외에 몇 가지 다른 단백질이 있다는 것을 발견했다. 진 등은 1998 에서 처음으로 참기름에서 다른 세 가지 단백질 sop 1, sop2, sop3 을 면역표기법으로 감정했다. 아미노산 서열 측정 결과, sop 1 은 벼의 칼슘 결합 단백질과 동족인 것으로 밝혀져 caleosin 으로 명명되었다. Caleosin 은 고등 식물에서 광범위하게 존재하며 조류와 곰팡이에도 비슷한 단백질이 있다. Caleosin 표현 특성은 원본에 따라 다릅니다. 벼 caleosin 은 주로 배아 형성 후기에 표현돼 ABA 나 수분협박에 의해 유도된 어린 묘목과 영양성장조직에서 표현될 수 있다. 벼칼슘단백질처럼 참깨 칼슘단백질은 씨앗에서만 표현되는 것 같다. 가뭄 조건 하에서, Abaridopsis 는 caleosin 동족단백질 mrna 를 감지하도록 ABA 에 의해 유도될 수 있다. 고 등 식물의 caleosin 단백질은 3 개의 도메인으로 분할 된다 알려진: (1)n 끝 친수 지역, ca2+ 와 결합 된 ef 손을 포함 한다. 대장균에서 표현된 Ef-hand 융합 단백질은 체외에서 ca2+ 와 결합될 수 있다. 참기름에서 분리된 Caleosin 1 도 ca2+ 와 결합할 수 있습니다. (2) N 끝의 포외막 위치 영역과 그에 인접한 프롤린이 풍부한 지역을 포함한 중간 소수성 영역. 이 구조는 참깨, 벼, 의남 등 일부 고등 식물에만 존재하는 것으로 알려져 있다. (3)c 측 친수성 구역. 대부분의 식물에서 caleosin 의 C- 말단 친수구는 보통 네 개의 키나아제 인산화 부위를 포함한다. 각기 다른 출처의 caleosin 의 구조와 생물학적 기능은 아직 명확하지 않다. 그것이 기름 생합성, 세포 내 수송, 지질 대사에 관여할 가능성이 있다고 추정된다.

3 식물성 기름 체 발현 시스템

3. 1 유질단백질 목적의 단백질 표현 전달체의 제작

앞서 언급했듯이 모든 유질단백질에는 세 개의 도메인이 있는데, 세 개의 도메인을 더하면 대략 15kd 이지만 유질단백질의 분자량은 매우 크다 (15-26kd), 여분의/Kloc-0 유질단백질의 뉴클레오티드 서열은 중간 소수성 지역이 매우 보수적이라는 점을 제외하면 N- 끝과 C- 끝 사이에 크게 다르다. 이는 외원 소분자량 단백질 코딩 유전자를 유질단백질 유전자의 5' 끝 또는 3' 끝에 삽입해 유질단백질 프로모터가 구동하는' 유질단백질 목적단백질' 식물 표현 전달체를 구축해 수용체 식물을 전환해도 식물성 기름에서 유질단백질의 위치에 영향을 미치지 않는다고 생각하게 한다. 유질단백질은 씨앗에서 특이하게 표현되어 유체 표면에 묻혀 있기 때문에 유전자 변형 식물에서 목적단백질은 융합 단백질의 형태로 유질단백질과 함께 유체에서 특이적으로 표현된다.

3.2 식물성 기름 발현 시스템의 장점

3.2. 1 융합단백질은 유질단백질을 분리하기 쉬우며 종자 특이성 단백질로 표현되어 오일 표면에 묻혀 있다. 외인성 유전자는 유질단백질의 N- 끝과 C- 끝 형성 융합 단백질을 삽입해도 유질단백질의 특성은 변하지 않는다. 따라서 유전자 변형 식물 씨앗 → 액체 추출 → 원심 분리 및 상층유상 회수를 통해 융합단백질을 세포의 다른 성분과 분리하여 90% 이상의 종자단백질을 제거할 수 있다. 융합단백질에 삽입된 목표단백질이 효소인 경우, 유질단백질-융합단백질은 효소로 직접 사용할 수 있으며, 효소 반응 후 회수하여 다음 효소 반응 (고정화 효소) 에 사용할 수 있다. 일반적으로 2 ~ 3 회 재사용한 후에도 비교적 강한 효소 활성을 유지한다. 융합단백질이 비활성 상태라면, 목표단백질은 유질단백질에서 잘라야 한다. 따라서 목적 단백질과 유질 단백질 유전자 사이에 단백질 분해 부위를 도입해야 하는데, 유질 단백질 유전자는 용혈소로 자주 사용된다. 융합 단백질이 소화된 후 가능한 둘을 분리하세요.

3.2.2 융합 단백질은 종자에서 장기간 안정적으로 보존될 수 있다. 성숙한 씨앗에서 가수 분해 효소의 활성이 감소하므로 융합 단백질은 분해되지 않고 종자에서 장기간 안정적으로 보존 될 수 있습니다. Van rooijen 과 moloney 의 연구에 따르면 유질단백질-GUS (베타-포도당알데히드산 글리코시다 제) 융합단백질은 4 C 에서 65438 0 년 이상 저장돼 분해되지 않았다.

3.2.3 씨앗은 운송하기 쉽고, 공업화 생산에서 씨앗이 성숙되는 과정에서 수분의 95% 이상이 증발하는 데 도움이 되며, 식물의 다른 부위보다 운송이 쉬워 목적단백질의 대량 생산에 편리함을 가져다 준다.

3.2.4 현재 가공기계는 종자 분쇄와 기름 분리에 적용된다. 예를 들면 식량가공용 수밀 연마와 유제품 공업에서 유제품을 분리하는 설비는 액체추출 후 원심분리유에 사용할 수 있다.

3.2.5 농산물의 부가가치를 높이다. 목표단백질을 분리한 후의 기름은 여전히 식용유나 공업용 기름으로 사용할 수 있으며, 목표단백질은 농산물의 부가가치를 크게 높일 수 있다.

3.3 식물성 기름으로 발현 된 외인성 단백질.

199 1 년, lee 등은 옥수수유질단백질 유전자가 유채로 전이되었다고 처음으로 보도했다. 옥수수유질단백질 mrna 는 유전자 변형 식물의 성숙한 씨앗에만 존재하며, 종자 총단백질의 65438 0%, 90% 의 표현산물은 기름 속에 있다. 단자엽 옥수수의 유질단백질 유전자가 유전자 변형 유채씨유체에서 정확한 전사, 번역 및 포지셔닝을 통해 단자엽 식물의 유질단백질 유전자에 충분한 정보가 있어 쌍자엽 식물에서 작용할 수 있다는 것을 보여준다. Holbrook 등은 1996 에서 유전자 총으로 유채 배아를 폭격했고, 단기간 표현 검사에서 유질단백질 -gus 융합단백질이 오일 체내에 제대로 위치한다는 것을 발견하고, lee 등의 실험 결론을 더 검증했다. Vanrooijen 과 moloney 는 gus 유전자를 의남 의유질단백질 유전자의 3' 끝에 삽입했다. 유전자 변형 식물에서 gus 활성의 80% 가 기름에 위치한다. 실험은 또한 유질단백질 -gus 융합 단백질 자체가 베타-포도당알데히드산 글리코시다 제 활성을 가지고 있어 gus 를 유질단백질에서 잘라낼 필요가 없다는 것을 발견했다. 융합 단백질과 오일이 결합되기 때문에 여러 차례 고정화 효소로 사용할 수 있다. 1995 에서 parmenter 등은 의남 의유질단백질 프로모터에 의해 구동되는 유질단백질-히 루딘 융합단백질의 표현 전달체를 구축하고 유채로 전환했다. 면역형광검사를 거쳐 융합단백질은 유체 표면에 위치하여 종자총단백질의 65438 0% 를 표현한다. 히루닌을 유질단백질 단백질 효소에서 분리해 생물학적 활성을 가진 히루틴을 얻었다. 유질 단백질 -gus 융합 단백질은 생물학적 활성성을 가지고 있지만 유질 단백질-히 루딘 융합 단백질은 히 루딘의 특정 항트롬빈 활성성이 없으므로 효소로 융합 단백질에서 잘라야합니다. 1997 유 등은 식물성 기름체 표현 시스템을 이용해 유전자 변형 유채에서 반추위 곰팡이 목당효소를 성공적으로 표현했다.

3.4 수용체 작물 및 표적 단백질 선택

수용체 작물은 유량이 높고 유전변이가 쉬운 작물이어야 한다. 대상 단백질의 선택은 (1) 분자량이 너무 클 수 없어 유면에서 융합 단백질의 정확한 위치에 영향을 주지 않도록 고려해야 한다. 현재 오일체가 표현하는 가장 큰 목적단백질은 67kd 의 gus； 입니다. (2) 목적단백질은 친수성이어야 한다. 특히 목적단백질이 융합단백질에서 잘라야 할 경우 더욱 그렇다. (3) 명확한 기능, 알려진 유전자 서열; (4) 가격이 비싸고 상업가치가 뛰어나 농산물의 부가가치를 크게 높일 수 있다.

위의 고려에 근거하여 본 실험실은 유채와 면화를 수용체로 선택했다. 식물성 오일 체표현 시스템의 적합성을 연구하기 위해 C 단에는 아미드화가 있어야 생체활성을 가질 수 있는 칼시토닌을 목적단백질로 선택했다. 현재, 이미 4 세대 유전자 변형 면화품과 유전자 변형 유채 식물을 얻었다. 유전자 변형 유채의 Pcr 검사는 칼시토닌 유전자가 유채 게놈에 통합되었다는 것을 증명했다. Pcr-southern 과 western 검사를 통해 대상 유전자가 면화에 통합되어 기름에 표현되었다는 것을 증명했다. 유전자 변형 식물에서 표적 단백질의 표현과 생체 활성 검사가 진행 중이다. "새로운 연어 칼시토닌 유사체 및 식물성 기름체 표현 시스템을 이용하여 외원단백질을 생산하는 방법" 은 이미 국가 특허를 출원했다 (별문 보도).

4 전망 및 문제점

Gus, 히 루딘, xylanase, 칼시토닌과 같은 외인성 단백질의 성공적인 표현. 유체 표현 시스템, 특히 고정화 효소 기술로 산업 생산 목적단백질에서의 응용 전망을 사람들에게 보여 주는 것은 의심할 여지가 없다. 하지만 새로운 식물생물반응기로서, (1) 어떻게 단백질 표현량을 더 높이고 목적단백질 분리 순화 비용을 낮추는 등 더 많은 연구와 검토가 필요하다. 유질단백질-융합단백질이 생물활성이 없을 때 이 문제는 더욱 두드러지고, 목표단백효소 소화, 분리순화 비용이 높으면 이 체계의 실제 응용에 심각한 영향을 미칠 것이다. (2) 일부 단백질은 글리코실화와 아미드화를 거쳐야 생물학적 활성을 갖는 것으로 알려져 있다. 목적단백질은 유체 표현 시스템에서 당화와 아미드화에 의해 결정될 수 있는지, 당기화와 아미드화의 정도는 더 많은 실험 연구가 필요하다. 오일 표현 시스템의 한계는 목적단백질의 분자량, 친수성, 소수성에 대한 요구가 있다는 데 있다. 표현 시스템은 전능하지 않습니다. 서로 다른 표현 시스템의 장점을 최대한 활용하고, 적절한 목적단백질을 표현하고, 인류를 축복하는 방법은 앞으로 더 연구해야 할 과제다.

출처: 농업생명기술 2003,11(5): 531-537.