세포 배양은 실험실에서 가장 흔하고 기초적인 실험이지만 가장 간단한 실험은 아니다. 세포 배양을 얕보지 마라, 여기에 큰 문제가 있다. 때때로 세포 상태가 좋지 않아 형질 감염, 약물 선별 등의 실험을 할 수 없다. 세포 배양에 영향을 미치는 요인이 많다. 먼저 배양기와 혈청을 말하다.
◆ MEM 은 Eagle 의 기본 배양기 (BME) 에서 발전해 왔으며, 그 중 성분의 범위와 농도가 모두 증가했다.
◆ 개선된 BEM 배양기는 쥐 섬유세포를 위해 설계되었으며, 현재는 벽세포를 배양하는 데 자주 사용된다. DMEM 의 아미노산 농도는 MEM 의 두 배, 비타민 농도는 MEM 의 네 배이다. HCO3- 과 CO2 의 이중 농도는 더 나은 완충 작용을 했다. 초기 레시피에서 포도당 함량은 1000 mg/L 이었는데, 나중에 일부 세포의 성장을 위해 포도당 함량은 4500 mg/L 로 조정되었는데, 이것이 바로 사람들이 흔히 말하는 저당고당이다.
◆ aMEM 에는 추가 아미노산, 비타민, 핵, 지방산이 함유되어 있어 영양성분에 대한 엄격한 요구 사항이 있는 세포를 포함한 다양한 세포 유형에 광범위하게 적용된다.
Ham 의 F 12 는 저혈청 농도에서 CHO 세포를 복제하도록 설계되었으며, 현재 복제 형성률과 일차 배양 분석에 널리 사용되고 있다. F 12 도 DMEM 과 같은 부피와 혼합하여 고농도 다양한 성분을 얻을 수 있습니다. 이 배양기는 이미 더 배양하기 어려운 많은 원대 배양과 세포주에 사용되었다.
◆ RPMI 1640 배양기는 림프세포 배양을 위해 특별히 설계된 것으로, 공중부양세포 배양에 널리 사용되고 있다.
몇 가지 배양기를 준비한 다음 2 주 정도 시간을 들여 간단한 세포 성장 실험을 하고 가장 적합한 것을 고르세요.
예전에는 대부분의 실험실이 건조 분말 배양기를 사용했지만 조제 과정이 복잡해서 용해, pH 조절, 여과 과정에서 농도 오차가 발생할 수 있고 일부 실험실의 수질도 좋지 않아 배양 효과가 달라질 수 있다.
혈청 선택:
성장인자를 함유한 혈청은 세포 증식을 촉진하고, 접착인자를 함유한 혈청은 세포 접착을 촉진하고, 항트립신 활성을 가지고 있다. 혈청도 미네랄, 지질, 호르몬의 원천이다. 가장 많이 쓰이는 혈청은 송아지 혈청, 신생소 혈청, 태우혈청, 말혈청이다. 소 혈청은 채혈 시간에 따라 분류된다. 채혈 시간이 빠를수록 영양이 풍부하고 항체 수가 적기 때문에 태우혈청은 수요가 높은 세포주와 복제 배양에 적합하다.
혈청 배치 간의 차이는 불가피하다. 서로 다른 제비 방법과 멸균 방법, 동물의 나이 차이, 혈청의 보존 조건으로 채혈 동물의 출처와 밀접한 관련이 있다. 목장에 따라 기후와 기타 환경 요인이 모두 혈청의 질에 영향을 줄 수 있다. 따라서 혈청을 선택했다면 가능한 한 오래 사용해야 합니다. 교체가 필요할 때도 가능한 원래의 혈청과 비슷해야 한다. 현재 많은 회사들이 혈청 비축량을 제공하고 있다. 일단 특정 배치의 혈청을 선정하면, 1 년 동안 충분히 비축해 두면 많은 번거로움을 피할 수 있다.
혈청은 세포 배양에서 없어서는 안 될 성분이지만, 배치에 따라 혈청의 차이가 크다. 혈청을 교체할 때는 교체된 혈청이 원래의 혈청과 비슷한지 확인하기 위해 대량의 검사가 필요하다. 혈청 공급 또한 고려해야 할 요소입니다.
무혈청 배양기는 일반적으로 SFM 으로 표현되는데, 이름에서 알 수 있듯이 세포 배양에는 혈청을 추가할 필요가 없지만 일부 응용에서는 성장인자나 세포인자를 추가할 수 있다. 무혈청 배양기에 점착인자, 성장인자, 필수 영양소, 호르몬 등 혈청의 주성분을 첨가하면 위에서 언급한 혈청이 가져오는 불리한 요인을 줄여 세포 배양의 조건을 더욱 안정시킬 수 있다. 하지만 완벽하지는 않습니다. 혈청배양에서 무혈청배양으로의 전환도 생각만큼 직접적이지는 않습니다. 분화 발육 단계에 있는 세포 (예: 방향성 전구 세포와 비교) 는 서로 다른 레시피를 필요로 하며, 성장인자와 세포인자의 선택은 특히 중요하다. 또한 혈청을 제거하는 동시에 혈청단백질의 보호와 해독작용도 제거되어 시약, 물의 순도, 기기의 청결도 요구가 더 높다. 게다가, 그것의 가격은 일반 배양기보다 훨씬 비싸다.
이렇게 다양해서 선택해도 머리가 아파요. 내피세포를 배양하는 MCDB 13 1 (적마) 과 같은 공개적으로 배합된 배양기를 제외하고 대부분의 액체 배양기는 특허를 가지고 있습니다. 즉, 그 중 성분은 기밀입니다. 그런 다음 문헌을 검색하고, 공급자 추천을 찾고, 자신의 세포로 몇 차례 대대로 배양하여 가장 적합한 배양기를 고를 수 밖에 없다. (윌리엄 셰익스피어, 햄릿, 독서명언) 결국 실천에서 참된 지식이 나온다.