형질 감염 실험에서 다음과 같은 점에 유의해야 한다: a. siRNA 의 순화: 형질 감염 전에 siRNA 의 크기와 순도를 확인한다. 고순도 siRNA 를 얻기 위해 유리섬유와 결합해 15%20% 아크릴 아미드 젤을 통해 반응에서 불필요한 뉴클레오티드, 소과뉴클레오티드, 단백질, 소금 이온을 씻거나 제거하는 것이 좋습니다.

화학적으로 합성 된 RNA 는 일반적으로 겔 전기 영동 (즉, 페이지 겔 정제) 을 실행하여 정제해야합니다

B. RNase 오염 방지: 소량의 RNase 로 인해 siRNA 실험이 실패할 수 있습니다. RNase 는 피부, 머리카락, 손이 닿거나 공기에 노출된 모든 물건과 같은 실험 환경에서 어디에나 있기 때문에 실험의 모든 단계가 RNase 에 의해 오염되지 않도록 하는 것이 중요하다.

C. 건강한 세포 배양과 엄격한 조작은 전염의 반복성을 보장한다. 일반 건강세포의 형질 감염 효율이 높고, 또 낮은 통과 횟수는 각 실험에 사용된 세포의 안정성을 보장할 수 있다. 실험을 최적화하기 위해 50 대 이하의 세포로 전염되는 것이 좋습니다. 그렇지 않으면 형질 감염 효율이 시간이 지남에 따라 현저히 떨어질 수 있습니다.

D. 항생제 사용 방지: Ambion 은 세포 이식부터 형질 감염 후 72h 까지 항생제 사용을 피하라고 제안했다. 항생제는 침투 세포에 독소를 축적한다. SiRNA 로 전염될 때, 일부 세포와 시약 전염에는 무혈청 조건이 필요하다. 이 경우 정상 배양기와 무혈청 배양기를 동시에 사용하여 비교 실험을 하여 최적의 형질 감염 효과를 얻을 수 있다.

E. 적절한 형질 감염 시약 선택: siRNA 준비 방법 및 표적 세포 유형에 따라 좋은 형질 감염 시약 선택 및 운영 최적화는 siRNA 실험의 성공에 매우 중요합니다.

F. 적절한 양성대조를 통해 전염과 검사 조건을 최적화한다. 가사 유전자는 대부분의 세포에 좋은 양성대조이다. 서로 다른 농도의 양성대조 siRNA 를 과녁 세포 (실험 과녁 siRNA 에도 적용) 로 옮긴 후 48 시간 동안 전염된 후 대조군 단백질 또는 mRNA 가 전염되지 않은 세포에 비해 감소하는 수준을 계산했다. 과도한 siRNA 는 세포 독성과 심지어 사망까지 초래할 수 있다.

G. 표시 siRNA 최적화 실험: 형광 표시 siRNA 는 siRNA 의 안정성과 형질 감염 효율을 분석하는 데 사용할 수 있습니다. 표기된 siRNA 는 또한 siRNA 의 세포 내 위치 및 이중 표기 실험 (표기 항체 사용) 으로 형질 감염 시 siRNA 로 가져온 세포를 추적하여 형질 감염과 하향 조절 목적의 단백질 표현을 결합할 수 있다.