우리는 13 년의 도서관 건설 경험을 가지고 수천 개의 도서관 건설을 완성했다. 채택된 기술과 테스트 키트 모두 시장에서 가장 질 좋은 문고 건설 시약, 건설된 각 문고의 각종 지표가 모두 시장의 최고 표준이며, 우리 문고 건설 성공률은 98% 이상이다. 우리 도서관 건설 제품과 관련하여 우리는 국내 회사 중 가장 높은 지표를 약속합니다.
상해 바오지는 다년간의 도서관 건설 경험을 결합하여' 전직영' 도서관 건설 기술을 대대적으로 보급하였다. 우리 제품은 다른 시공 방법 (주로 takara 의 SAMRT 법과 invitrogen 의 gateway 법) 에 비해 기술과 품질에 큰 장점을 가지고 있습니다.
우리의 도서관 건설 제품과 관련하여, 우리는 다음과 같은 지표를 약속합니다. 이러한 지표는 국내 회사 중에서 가장 높습니다.
원본 라이브러리 용량이1*10 7 cfu 보다 큽니다.
평균 삽입 조각이1200bp 보다 큽니다. 을 눌러 섹션을 인쇄할 수도 있습니다
복제 양성율은 95% 이상에 달했다.
-응? 1. 우리는 동종 재조합으로 문고를 구축하고, 어떤 내체효소 절단과 연결 과정도 필요하지 않고, 유전자가 내체효소에 의해 잘리지 않도록 하고, 유전자의 무결성을 보장하는 반면, Clonetech 는 내체효소 연결을 통해 구축된다.
-응? 2. 우리는 재조합을 통해 cDNA 를 전달체로 재구성하고 있으며 복제 기술의 SMART T4 연결 효소법보다 훨씬 효율적이기 때문에 원문 라이브러리의 라이브러리 용량이 1 * 10 7 이상이라고 약속합니다. 그리고 재조직의 위양성율은 매우 낮다. 여기 고객 중 일부는 빈 부하 없이 한 번에 30,000 개의 클론을 테스트했습니다. 우리는 양성률이 98% 를 초과하겠다고 약속했는데, 이것은 효소 절단 연결법과는 비교가 안 된다.
-응? 3.Clonetech 의 SMART 메소드는 PCR 을 사용하여 두 번째 체인을 합성합니다. PCR 의 선택적 억제와 경쟁 증폭으로 인해 유전자 중복도가 높고, 저풍도의 유전자는 PCR 에 의해 증폭될 수 없기 때문에 손실되고, 긴 조각의 유전자도 손실되고, 많은 반복서열이 있을 수 있다. 특히 초기 RNA 샘플의 양이 매우 작을 때 (예: 5ug RNA 에서는 15 사이클 이상의 PCR 증폭이 필요하며 라이브러리의 품질이 크게 감소함) 라이브러리에 포함된 유전자의 수가 크게 줄어든다. 우리의 cDNA 합성 방법은 다양한 효소로 16 도 항온에서 제 2 사슬을 직접 합성하여 샘플 자체의 유전자 상황에 완전히 충실하며, 샘플의 유전자 상태와 유전자 크기를 인위적으로 바꾸지 않는 것이다.
4. 우리는 고품질의 역전사 효소, 인정받는 최고의 역전사 효소를 사용한다. Clonetech 의 역전사 효소에 비해 더 높은 역전사 온도 (섭씨 55 도 반전, clonetech 의 역전사 효소는 42 도 반전, 더 높은 온도는 RNA 의 2 차 구조를 열어 더 긴 cDNA 를 얻을 수 있다), 역전 효율과 cDNA 길이가 훨씬 좋다. 우리는 라이브러리의 평균 삽입 조각이 1.3KBP 이상이고 최소 길이는 1Kbp 이상이며, clonetech 의 SMART 방법으로 구축된 라이브러리는 일반적으로 수백 BP 에 불과합니다.
도서관 건설 과정:
1.RNA 추출
2.mRNA 추출
3.3.cDNA 의 효소 합성
4.cDNA 커넥터
5.cDNA 는 길이별로 분리되어 있습니다.
6.6.cDNA 와 효모 2 교잡문고 전달체 (pGADT7 또는 pDEST22) 의 완전 직접 재편성.
7. 재조합 제품의 전기 변환
라이브러리 검출 및 플라스미드 추출
3. 1 완전 직접법과 SMART 법의 비교와 장점
3.2? 완전 직접 및 게이트웨이 방법의 비교 및 이점
25 일 (영업일 기준) 이내에 효모를 바꿔야 할 경우 15 일 (영업일 기준) 연장합니다.
참고: 1: 이 효모 라이브러리는 균질화 단계를 추가합니다. DSN 의 균질화 방법을 사용하여 고품질의 균질화 효모 하이브리드 라이브러리를 구축하여 후속 효모 스크리닝의 작업량과 스크리닝 효율성을 크게 줄일 수 있습니다.
고객은 지정된 효모 2 하이브리드 cDNA 라이브러리를 구축하고 고객은 조직, 세포 또는 총 RNA 를 제공할 수 있습니다.
세포 샘플: 세포 수가 1 * 10 7 보다 큽니다.
동물 샘플: 1 g 보다 큼
식물 샘플: 2g 이상
총 RNA: 200 마이크로그램 이상
현재, 우리는 샘플이없는 수천 개의 라이브러리 구축을 성공적으로 완료했습니다. 주요 고객은 중국과학원, 상해식물생리생태연구소, 상해교통대학, 저장대학교, 저장성 농업과학원, 산둥 농업과학원 등을 위해 효모 2 교잡문고 건설을 마쳤다. 종에는 인간, 마우스, 쥐, 벼, 의남, 모란, 벼진드기, 사과, 유채, 밀, 조개 껍질, 포도, 곰팡이 등이 있다.
우리는 국내에서 라이브러리 건설과 라이브러리 선별을 동시에 제공할 수 있는 몇 안 되는 회사이다. 효모 2 하이브리드 필터링 서비스의 경우 미끼 유전자 서열 만 제공하면 됩니다. 우리는 다음과 같은 일을 할 것이며, 심사 가격은 인민폐 3 만 위안이다.
1. 미끼 전달체의 시퀀싱 검증 및 이중 잡교 선별 전달체의 구축.
2. 미끼 유전자의 자활성화 검사, 검사 합격 후 다음 실험을 계속한다.
3. 미끼 플라스미드는 효모 세포를 변형시키고, 검증 후 라이브러리 플라스미드를 변형시킨다.
효모 스크리닝 및 3AT 조건 최적화
5. 검진 결과 정렬
6. 필터 결과의 회전 검증
7. 필터링 결과 제출: 필터링 보고서, 필터링 결과의 시퀀싱 결과 및 blast 결과, 필터링 결과 복제를 포함한 플라스미드.
9. 1. 어떻게 적절한 데이터베이스 구축 방법을 선택하여 라이브러리를 만들 수 있습니까?
우리는 시장에서 세 가지 데이터베이스 구축 방식을 동시에 제공할 수 있는 유일한 회사로서 우리 회사의 기술력을 설명하기에 충분하다. ※ 。
※ 세 가지 방법의 비교는 다음과 같습니다.
-응? 1) Clonetech 의 똑똑한 방법은 기본적으로 제거되었습니다. 위에서 우리는 상세한 기술 대비를 가지고 있는데, 그것의 유일한 장점은 RNA 의 초기 양이 매우 적을 수 있다는 것이다. 일반적으로 몇 ug 만 있으면 된다. 이런 방법은 원가가 매우 낮아 일반적으로 추천하지 않는다.
-응? 2) invitrogen 방법, 품질이 SMART 보다 훨씬 좋고, 시약 품질 요구 사항이 높기 때문에 invitrogen 오리지널 시약 전체를 사용해야 합니다. 우리는 모두 invitrogen 의 시약 (Invitrogen Corporation) 로 문고를 구축하고 기술적인 개선을 하여 문고의 질을 높였다. 이 방법은 높은 초기 RNA 가 필요하며 권장 초기 복용량은 200ug 이상입니다. 하지만 이 접근법에는 효모 라이브러리를 얻기 위해 두 번의 재구성이 필요하다는 심각한 단점이 있다. 한 번 더 재구성하면 라이브러리 증폭 과정이 한 번 더 진행되어 라이브러리의 품질에 심각한 영향을 미친다는 것이다. 위에 상세한 기술 비교와 소개가 있습니다.
-응? 이런 식으로 라이브러리를 짓는 다른 회사들은 상업키트로만 라이브러리를 만들 수 있고, 아무런 개선도 없다. 그리고 구매 채널 때문에, 그들은 테스트 키트 속의 시약 몇 개를 살 수 없고, 품질도 크게 할인될 것이다. 예를 들어, DH 10B 를 사용하여 감성 세포를 변환하는데, 이 감성 세포의 변환 효율은 국산보다 100 배 이상 높다. 이런 능력 있는 배터리는 많은 세관 승인이 있어야 구매할 수 있고, 다른 회사들은 관련 자질이 없어 수입할 수 없다.
-응? 3) 전직접특허법, 이것은 우리의 독점 특허 방법이며, invitrogen 방법에 대한 중요한 개선으로, 그것의 장점 (PCR 증폭할 필요 없음, 라이브러리 충실도가 높음) 을 보존하고, 두 번의 재구성이 필요한 단점을 없애고 라이브러리의 품질을 크게 높였다. 평균 길이는 invitrogen 방법에 비해 200bp, 라이브러리 용량은 10 배 이상 증가할 수 있습니다. 이 방법에는 invitrogen 메서드와 같은 양의 RNA 가 필요합니다.
9.2. 바오지 생물이 제공하는 효모 쌍론 문고에는 어떤 제품 내용이 있습니까?
※ 우리가 제공하는 문고 제품에는 문고 품질 (200ug 이상) 과 대장균 문고의 글리세린 균이 포함됩니다. 동시에, 우리는 효모 세포로 전환되는 글리세린 세균 문고를 제공할 수 있다. 효모 세포로 변환된 100 라이브러리 글리세린 균을 제공하고 100 라이브러리 필터링을 할 수 있습니다.
이 중 문고의 플라스미드는 * * * 전환법으로 선별할 수 있고, 효모세포문고의 글리세린균은 마이팅법으로 선별할 수 있으며, 선생님의 실험습관에 따라 자유롭게 선택할 수 있어 결과는 차이가 없다. ※ 。
9.3. 도서관 품질을 어떻게 검사합니까?
문고 품질의 간단한 금기준은 샘플의 유전자가 모두 문고에 있고, 절반 이상의 전체 길이 유전자가 있다면 문고에 합격한다는 것이다. ※ 。
라이브러리 테스트의 경우 Dell 에서 제공하는 제품에 대해 다음과 같은 테스트를 수행할 수 있습니다. ※:
교사의 샘플 정보에 따르면, 3 ~ 5 개의 저복사 유전자를 선택하고 합성 프라이머를 설계하고, 우리가 제공한 라이브러리 플라스미드를 템플릿으로 사용하여 PCR 증폭을 진행한다. 저복제 유전자가 모두 증폭될 수 있다면, 고복사 유전자는 손실되지 않고, 문고 품질은 합격으로 판정될 수 있다.
우리가 제공한 대장균 문고에 있는 글리세린균의 경우 그라데이션 희석으로 평판 배양을 할 수 있고, 다음날 문고 용량을 계산하고, 동시에 단일 복제를 선택하여 PCR 증폭과 시퀀싱 테스트를 하여 삽입된 조각의 길이와 공률을 판단할 수 있다. ※ 。
9.4. 도서관의 질을 어떻게 평가합니까?
문고 품질의 핵심 지표는 문고 용량, 공률 및 삽입된 세그먼트의 평균 길이입니다. ※ 。
라이브러리의 원시 스토리지 용량은 가능한 한 높아야 합니다. 우리 회사는 1 * 10 7 보다 큰 저장 용량을 약속했다. 이는 원시 저장 용량, 즉 확대 과정을 거치지 않고 직접 변환된 저장 용량이다. ※. 다른 회사가 약속한 1 * 10 6 의 라이브러리 용량보다 10 배 이상 많다. 다음은 도서관 용량이 도서관 품질에 미치는 영향에 대해 자세히 설명합니다.
하등 생물을 제외하고 생물 샘플의 유전자 수는 약 5 * 10 4 이며, 문고는 최소한 100 회, 즉 저장량이 최소한 5 * 10 6 에 도달해야 한다. ※ 。
식물 샘플의 경우, 유전자 수는 인간보다 훨씬 더 많다. 예를 들어 벼 샘플은 인류의 2-3 배, 밀 샘플은 인류의 5-6 배이기 때문에 더 많은 창고 용량이 필요하다. ※ 벼 샘플의 경우 100 배의 유전자 수를 덮어야 하며 필요한 원시 라이브러리 용량은 1 * 10 7 보다 큽니다. 시중에 나와 있는 다른 회사가 제공하는 라이브러리는 최대 10 회까지만 덮어쓸 수 있습니다. 이렇게 낮은 커버율은 필연적으로 대량의 유전자 손실로 이어질 것이다.
일부 회사들에게 도서관 용량이 높을수록 좋다. 이는 절대적으로 무책임하며 도서관 품질 불합격을 위한 불합리한 핑계를 만드는 것이다. ※ 。
삽입 유전자의 길이에 관해서는, 다른 회사의 평균 길이는 약 800bp 이며, 우리 회사는 1200bp 이상을 약속할 수 있어 격차가 크다. 삽입 조각 길이가 라이브러리 품질에 미치는 영향에 대해 자세히 설명합니다. ※:
일반적으로 기능유전자의 길이는 200 개 이상의 아미노산을 초과할 것이다. 즉, 코드화된 영역은 600bp 를 넘을 것이다. 코딩 영역 외에도 5'UTR 영역, 3'UTR 영역 및 polyA 영역이 있습니다. 전반적으로 이 유전자의 길이는 최소한 1000bp 이다. ※ 문고는 혼합물이기 때문에 경쟁 억제가 있을 수 있고, 짧은 유전자가 너무 많으면 긴 유전자의 비율과 긴 유전자의 표현 풍도에 영향을 미칠 수 있다.
우리 문고산물에 삽입된 조각의 평균 길이는 1200bp 이상이고 가장 짧은 길이는 1000bp 정도입니다. ※ 라이브러리 스크리닝의 경우 하나의 유전자 단편만 필요하다는 의미는 아닙니다. 단백질의 기능은 여러 가지 요인의 참여가 필요하다. 삽입된 유전자가 너무 짧다면, 선별된 결과는 단지 유전자 단편일 뿐, 심지어 polyA 근처의 짧은 유전자일 뿐이다. 이 결과의 타당성은 어디에 있는가? 기본적으로 위양성 결과라고 볼 수 있다.
※ 일부 회사들에게 문고에 있는 유전자 삽입 단편의 길이가 길수록 좋지 않다고 주장하는 것은 고객에게 매우 무책임하고 불합리한 사기다. 단지 더 긴 단편의 길이에 도달할 기술이 없기 때문이다.
9.5. 교배와 * * * 어느 것이 좋습니까?
* * * 전환과 마이팅의 결과는 동일하지만 라이브러리 입자를 효모 세포로 옮기는 방법은 후속 라이브러리 스크리닝에 영향을 미치지 않으며 교사의 실험 습관에 따라 자유롭게 선택할 수 있습니다.