목적 유전자가 식물 뿌리에서 표현되고 뿌리 세포 밖으로 분비되도록 어떻게 건설체를 설계할 수 있습니까?

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식물 표현 벡터에 특정 외원 유전자를 구축하고 수용체 식물로 옮기는 것은 식물 유전자 전환의 최종 목적이 아니다. 이상적인 형질 전환 식물은 일반적으로 이상적인 표현형 특성을 생성하기 위해 특정 부위와 특정 시간 동안 높은 수준의 외인성 유전자 표현이 필요합니다. 하지만 최근 20 년 동안의 발전 역사에 따르면, 외원 유전자는 비효율적 표현, 표현 산물 불안정, 심지어 유전자 불활 또는 침묵과 같은 수용체 식물에 자주 등장하여 유전자 변형 식물이 실제 응용에 투입되지 못하게 한다. 또한 유전자 변형 식물의 안전성은 많은 나라에서 주목을 받고 있습니다. 예를 들어, 유전자 변형은 꽃가루와 함께 전파될 수 있고, 항생제 선별 표시 유전자는 일부 임상 항생제를 무효로 만들 수 있습니다. 이러한 문제들의 출현으로 첨단 기술 식물 유전자 공학이 전례 없는 곤경에 처하게 되었다. 이러한 문제를 해결하기 위해 최근 몇 년 동안 식물 유전자 변형 기술에 대한 다양한 탐구와 개선이 이루어졌으며, 식물 표현 전달체의 개선과 최적화는 그 중 가장 중요한 내용 중 하나이다. 이 글은 이미 이루어진 진전을 총결하였다.

1 프로모터 선택 및 변환 시작

외원 유전자 표현 부족은 종종 이상적인 유전자 변형 식물을 얻지 못하는 중요한 원인이다. 프로모터는 유전자 표현을 결정하는 데 중요한 역할을 하기 때문에 가장 먼저 고려해야 할 것은 적절한 식물 프로모터를 선택하고 그 활성화를 높이는 것이다.

현재, 식물 표현 전달체에서 광범위하게 사용되는 시동자는 구성형 시동자이다. 예를 들어, 대부분의 쌍자엽 형질 전환 식물은 CaMV35S 프로모터를 사용하는 반면, 단엽 형질 전환 식물은 주로 옥수수의 유비퀴틴 프로모터와 벼의 Actinl 프로모터를 사용합니다. 이러한 구성형 표현 시동자의 통제하에 외원 유전자는 유전자 변형 식물의 모든 부분과 모든 발육 단계에서 표현될 것이다. 하지만 수용체 식물에서 외원 유전자의 지속적이고 효율적인 표현은 낭비를 초래할 뿐만 아니라 식물의 형태 변화를 일으켜 식물의 성장과 발육에 영향을 미치는 경우가 많다. 외원 유전자가 식물에서 효과적인 역할을 하고 식물에 미치는 악영향을 줄이기 위해, 특이표현 프로모터의 연구와 응용에 점점 더 많은 관심을 기울이고 있다. 발견된 이성 시동자는 주로 장기 이성 시동자와 유도 이성 시동자를 포함한다. 예를 들어 종자 특이성 프로모터, 열매 특이성 프로모터, 엽육세포 특이성 프로모터, 루트 이성 프로모터, 상해 유도 프로모터, 화학 유도 프로모터, 광 유도 프로모터, 열유도 프로모터 등이 있다. 이러한 특이한 시동자의 복제와 응용은 식물에서의 외원 유전자의 특이적 표현의 기초를 다졌다. 예를 들어, 스위스 CIBA- 게이키는 PR-IA 프로모터를 이용하여 유전자 변형 담배에서 Bt 독소 유전자의 표현을 통제한다. 프로모터는 살리실산과 그 유도물에 의해 유도될 수 있기 때문에 해충이 재발하는 계절에 저렴하고 오염되지 않은 화학물질을 뿌려 항충유전자의 표현을 유도하는 것은 매우 효과적인 방법이다.

식물 유전자 변형 연구에서 천연 시동기를 사용하면 만족스러운 결과를 얻지 못하는 경우가 많다. 특히 특이성 표현과 유도표현을 할 때 표현 수준이 대부분 좋지 않다. 기존 프로모터를 개조하면 복합 프로모터를 구축하는 것이 매우 중요한 방법이 될 것이다. 예를 들어, Ni 등은 문어알칼리 합성효소 유전자 프로모터의 전사 활성화 영역을 단로알칼리 합성효소 유전자 프로모터와 결합한 결과, GUS 표현 결과 손질된 프로모터 활성성이 35S 프로모터보다 현저히 높다는 것을 알 수 있다. 오서 등은 유도형 PI-II 유전자 프로모터와 벼 Actinl 유전자 인트론 1 을 결합시켜 새로운 프로모터의 표현 활성화를 거의 10 배 (특허) 증가시켰다. 이 인공 시동자들은 식물 유전자 공학 연구에서 중요한 역할을 했다.

2. 번역 효율성 향상

외원 유전자의 번역 효율을 높이기 위해, 전달체를 만들 때 일반적으로 유전자를 손질해야 하는데, 주로 세 가지 측면을 고려한다.

2. 1 5'-3'- 비번역 시퀀스 추가

많은 실험에서 진핵 유전자의 5'-3'- 비번역 서열 (UTR) 은 유전자의 정상적인 표현에 매우 필요하며, 이 단편의 누락으로 인해 종종 mRNA 안정성과 번역 수준이 현저히 떨어지는 것으로 나타났다. 예를 들어 담배 꽃잎바이러스 (TMV) 126 kda 단백질 번역 시작 지점 상류에는 68bp 뉴클레오티드로 구성된 오메가 요소가 있어 리보당체에 새로운 결합점을 제공하여 Gus 유전자의 번역 활성화를 몇 배로 높일 수 있다. 현재, 많은 벡터들이 외원 유전자의 5' 끝에 번역 향상 시퀀스를 추가했다. Ingelbrecht 등은 많은 유전자의 3' 끝서열을 연구한 결과 문어알칼리 합성효소 유전자의 3' 끝서열이 NPTII 유전자의 순간적인 표현을 20 배 이상 높일 수 있다는 것을 발견했다. 게다가, 유전자마다 3'- 말단 서열은 유전자 표현 촉진에 있어서 서로 다른 효율을 가지고 있다. 예를 들어, RBC 의 3'- 말단 서열은 찰케톤합효소 유전자의 3'- 말단 서열보다 60 배 높은 유전자 표현을 촉진한다.

2.2 초기 암호 주위의 시퀀스 최적화

비록 시작 코돈은 생물학에서 보편적으로 존재하지만, 서로 다른 생물원의 유전자는 시작 코돈 주위에 모두 특수한 서열을 가지고 있다. 예를 들어 식물 시작 코돈 주변 서열의 전형적인 특징은 AACCAUGC 이고, 동물 시작 코돈 주변 서열은 CACCAUG 로 원핵 시작 코돈 주변 서열과 크게 다르다. 코삭은 시작 코돈 ATG 주변의 염기점 돌연변이가 변환과 번역에 미치는 영향을 상세히 연구한 결과, 진핵생물에서는 시작 코돈 주위의 서열이 ACCATGG 일 때 변환과 번역 효율이 가장 높다는 결론을 내렸다. 특히 -3 위 A 는 번역 효율성에 매우 중요하다. 이 시퀀스는 나중에 코삭 시퀀스라고 불리며, 전달체의 구조를 표현하는 데 사용된다. 예를 들어, 박테리아의 키티 나제 유전자가 있는데, 초기 코딩 순서는 UUUAUGG 입니다. 그것을 ACCAUGG 로 개조할 때, 담배에서의 표현량은 8 배 증가했다. 따라서 비식물 유전자로 표현 벡터를 만들 때는 식물 시작 코돈 주변 서열의 특징에 따라 개조해야 한다.

2.3 형질 전환 유전자 코딩 영역.

외원 유전자가 원핵 생물에서 나온 것이라면, 표현 메커니즘의 차이로 인해 식물에서의 표현 수준은 종종 매우 낮다. 예를 들어, 소운금나물균에서 온 야생형 살충단백질 유전자는 식물에서의 표현 수준이 매우 낮았는데, 이는 원핵 생물과 식물 유전자의 차이로 인해 mRNA 안정성이 떨어지는 것으로 밝혀졌다. 미국 맹산도사의 Perlak 등은 독단백질 아미노산 서열을 바꾸지 않고 살충단백질 유전자를 개조해 식물이 선호하는 코돈, GC 함량을 증가시켜 기존 서열에서 mRNA 안정성에 영향을 미치는 원소를 제거했다. 그 결과, 유전자 변형 식물에서 독단백질의 표현량이 30 ~ 100 배 증가하여 뚜렷한 항충 효과를 얻은 것으로 나타났다.

3 위치 효과 제거

외원 유전자가 수용체 식물로 넘어갈 때, 유전자 변형 식물에 따라 표현 수준이 크게 달라지는 경우가 많다. 이는 주로 수용체 식물 게놈에 있는 외원 유전자의 삽입 지점이 다르기 때문이다. 이것은 소위 "위치 효과" 입니다. 위치 효과를 없애기 위해 모든 외원 유전자를 식물 게놈의 전사 활성 영역으로 통합하는데, 현재 표현 전달체 구축 전략에서는 일반적으로 핵기질 결합 영역과 정점 통합 기술을 적용하는 것을 고려하고 있다.

매트릭스 결합 영역 (Matrix association region, MAR) 은 진핵세포 염색질에 존재하는 DNA 서열로, 특이적으로 핵기질을 결합한다. 일반적으로 MAR 시퀀스는 활성 전사 DNA 고리 구조의 경계에 있는 것으로 간주되며, 그 기능은 각 전사 단위를 주변 염색질의 영향을 받지 않고 상대적으로 독립적으로 유지하는 분할 효과를 만드는 것입니다. 관련 연구에 따르면 MAR 을 목적유전자의 양쪽에 배치하고, MAR-gene-MAR 구조가 포함된 식물 표현 전달체를 구축해 유전자 전환을 하면 목적유전자의 표현 수준을 크게 높이고, 유전자 변형 식물 간 목적유전자 표현 수준의 차이를 줄여 위치 효과를 줄일 수 있는 것으로 나타났다. 예를 들어 Allen 등은 이원 MAR (효모에서) 과 동원MAR (담배에서) 이 담배의 Gus 유전자 표현에 미치는 영향을 연구한 결과 효모의 MAR 이 유전자 조작의 표현 수준을 평균 12 배로 높일 수 있는 반면, 담배 자체의 MAR 은 유전자 조작의 표현 수준을 평균 60 배 높일 수 있는 것으로 나타났다. 닭 리소자임 유전자에서 나온 MAR 도 같은 역할을 할 수 있다.

또 다른 실행 가능한 방법은 사이트 지향 통합 기술을 채택하는 것입니다. 이 기술의 주요 원리는 변환 벡터에 숙주 염색체와 동족인 DNA 조각이 들어 있을 때 외원 유전자가 동원을 통해 염색체의 특정 부위로 통합될 수 있다는 것이다. 실제 응용에서는 먼저 염색체 전사 활성 영역의 DNA 조각을 분리한 다음 식물 표현 벡터를 구축해야 한다. 미생물의 유전자 조작에서 동원재편성점 통합은 이미 통상적인 기술이 되었으며, 외원 유전자의 점 통합은 동물에서 이미 성공을 거두었지만 식물에서는 엽록체 표현 전달체를 제외하고는 핵변환 성공 보도가 거의 없다. (존 F. 케네디, Northern Exposure (미국 TV 드라마), 동물명언)

엽록체 발현 벡터의 제작

외원 유전자 표현의 비효율, 핵 유전자가 꽃가루 확산에 따른 위치 효과와 불안정성 등을 극복하기 위해 최근 몇 년간 출현한 새로운 유전자 변환 기술인 엽록체 전환은 그 장점과 발전 전망으로 점점 더 인정받고 있다. 지금까지 담배, 벼, 의남, 감자, 유채 5 개 식물에서 엽록체 전환 (후병카이 등 발표) 이 이뤄져 이 변환 기술이 식물 유전공학의 새로운 성장점이 됐다.

현재, 많은 식물 엽록체 게놈의 전체 서열이 확인되어, 이는 동원구조 조정 메커니즘을 통해 외원 유전자 포인트를 엽록체 게놈에 통합하기 위한 토대를 마련했다. 현재 구축되어 있는 엽록체 표현 전달체는 기본적으로 고정 점 통합 전달체이다. 구축된 엽록체 표현 전달체는 기본적으로 지정 사례 전달체에 속한다. 엽록체 표현 벡터를 만들 때, 보통 외원 유전자 표현 상자의 양쪽에 엽록체 DNA 서열을 연결하는데, 이를 동원재조합 단편 또는 타깃 조각이라고 한다. 벡터가 엽록체에 도입될 때, 이 두 조각이 엽록체 게놈의 같은 조각과 함께 재조합하면, 외원 유전자를 엽록체 게놈의 특정 부위에 통합할 수 있다. 작물 개량을 위한 엽록체 변환에서 동원재구성이 필요한 후 외원 유전자의 삽입으로 엽록체 유전자의 원래 서열이 손실되거나 원래 유전자가 삽입 지점에서 기능을 손상시키지 않는다. 이러한 요구 사항을 충족하기 위해 rbcL/accD, 16 strnv/rpsl2rps7, psba/trnk, rps7/ndhb 와 같은 두 개의 인접한 유전자를 소스 재구성 세그먼트로 선택했습니다. 동원이 재편성될 때 외원유전자점은 인접한 두 유전자의 간격에 삽입되어 원유전자의 기능이 영향을 받지 않도록 한다. 최근 Daniel 등은 담배 엽록체 유전자 trnA 와 trnI 를 동원재조합 단편으로 이용해 범용 전달체를 구축했다. TrnA 와 trnI 의 DNA 서열이 고등 식물에서 매우 보수적이기 때문에 저자는 이 전달체가 여러 식물의 엽록체 전환에 사용될 수 있다고 생각한다. 만약 이 전달체의 공통성이 증명된다면, 이 작업은 의심할 여지 없이 편리하고 실용적인 신형 엽록체 표현 전달체를 구축하는 데 좋은 아이디어를 제공할 것이다.

엽록체 게놈의 높은 복사본으로 인해 엽록체 게놈에 통합된 외원 유전자는 종종 효율적으로 표현된다. 예를 들어, McBride 등은 처음으로 Bt CryIA(c) 독소 유전자를 담배 엽록체로 옮겼는데, Bt 독소 단백질의 표현량은 잎총 단백질의 3 ~ 5% 에 달하지만, 일반적인 핵변환 기술은 0.00 1% ~ 0.6% 에 달할 수밖에 없다. 최근 Kota 등은 Bt Cry2Aa2 단백질 유전자를 담배 엽록체로 옮긴 결과 담배 잎의 중독성 단백질 표현량이 높아 수용성 단백질의 2 ~ 3% 를 차지하며 핵전환보다 20 ~ 30 배 높은 것으로 나타났다. 유전자 변형 담배는 민감한 곤충에 저항할 수 있을 뿐만 아니라 내성이 높은 곤충도 죽일 수 있다. Staub 등은 최근 담배 엽록체로 전입한 사람의 성장호르몬 유전자 표현량이 잎총 단백질의 7% 로 핵전환보다 300 배 높다고 보도했다. 이 실험들은 엽록체 표현 전달체의 건설과 전환이 외원 유전자의 효율적인 표현을 실현하는 중요한 방법 중 하나라는 것을 충분히 보여준다.

위치 신호 적용

이러한 전달체 최적화 전략의 주요 목적은 외원 유전자의 전사와 번역 효율을 높이는 것이다. 하지만 높은 수준의 외원 단백질이 식물 세포에 안정적으로 존재할 수 있는지, 얼마나 축적될 수 있는지는 식물 유전자 전환에 고려해야 할 또 다른 중요한 문제이다.

최근 연구에 따르면 일부 외원 유전자를 적절한 위치 신호 시퀀스와 연결하여 엽록체, 내질망, 액포 등과 같은 세포의 특정 부위로 운반할 경우 외원 단백질의 안정성과 축적을 크게 높일 수 있는 것으로 나타났다. 이는 내질망 등 일부 지역이 일부 외원단백질에 비교적 안정적인 내환경을 제공하여 외원단백질의 분해를 효과적으로 막았기 때문이다. 예를 들어, Wong 등은 의남 의남 rbcS 아기의 중계 펩타이드 서열을 살충단백질 유전자와 연결시켜 살충단백질이 유전자 변형 담배의 엽록체에 특이하게 축적될 수 있고, 외원단백질의 총 누적량은 대조군보다 10 ~ 20 배 높다는 것을 발견했다. 요즘, 송, 등. 또한 rbcS 아기의 전달펩티드 서열을 PHB 합성과 관련된 유전자에 연결시켜 유전자 발현 산물을 유전자 변형 유채 씨앗의 질체에 축적시켜 외원 단백질의 함량을 높이려고 한다. 또한 만델트 등과 스하우텐 등은 내질망 위치 지정 시퀀스 (4 펩티드 KDEL 의 코드화 시퀀스) 를 외원 단백질 유전자와 연결시켜 유전자 변형 식물의 중외원 단백질 함량이 눈에 띄게 높아진 것으로 나타났다. (윌리엄 셰익스피어, Northern Exposure (미국 TV 드라마), 유전자명언) 위치 신호는 단백질 축적을 촉진하는 데 긍정적인 역할을 하지만, 동일한 위치 신호가 모든 단백질에 적용되는지 여부는 더 확정해야 한다.

유전자 발현 향상에 인트론 6 의 응용

인트론 증강 유전자 발현의 역할은 Callis 등이 유전자 변형 옥수수에서 처음 발견한 것으로, 옥수수 알코올 탈수소 효소 유전자 (Adhl) 의 첫 번째 인트론 (인트론 1) 은 외원 유전자의 표현을 크게 향상시켰으며, 그 유전자의 다른 인트론 (예: 인트론 8, 인트론 9) 도 일정하다. 나중에 Vasil 등은 옥수수 과당 합성효소 유전자의 첫 번째 인트론이 CAT 의 표현 수준을 10 배로 높일 수 있다는 사실을 발견했다. 벼근동단백질 유전자의 세 번째 인함자도 보고 유전자의 표현 수준을 2 ~ 6 배 높일 수 있다. 지금까지 인트론이 유전자 표현을 강화하는 메커니즘은 아직 명확하지 않지만, 인트론의 존재는 가공효율과 mRNA 안정성을 높일 수 있다고 생각하는 경우가 많다. Tanaka 등의 많은 연구에 따르면, 유전자 표현에 대한 인트론의 증강은 주로 단자엽 식물에서 발생하지만 쌍자엽 식물에서는 발생하지 않는다.

인트론은 유전자 발현을 향상시킬 수 있기 때문에, Mcelroy 등은 단자엽 식물 발현 벡터를 만들 때 벼근동단백질 유전자의 첫 번째 인트론을 유전자 프로모터의 하류에 특별히 남겨 두었다. 마찬가지로, Christensen 등은 단자엽 식물에서 외원 유전자의 표현을 강화하기 위해 벡터를 구축하는 동안 옥수수 범소 유전자의 첫 번째 인트론을 프로모터의 하류에 두었다. 그러나 특정 인트론이 유전자 표현에 미치는 촉진 작용은 프로모터 강도, 세포 유형, 과녁 유전자 서열 등 다양한 요인에 달려 있으며, 때로는 인트론이 운반체에서의 위치에 따라 달라지는 경우도 있다는 연구결과도 있다. 예를 들어, 옥수수 Adhl 유전자의 인트론 9 는 Gus 유전자의 5' 끝에 배치되며, CaMV35S 프로모터의 통제하에 Gus 유전자의 표현이 향상되지 않았다. 인트론이 Gus 유전자의 3- 끝에 있을 때, 같은 시동자의 통제하에 Gus 유전자의 표현 수준은 약 3 배 증가했다. 인트론이 유전자 표현에 작용하는 메커니즘은 복잡할 수 있으며, 인트론을 이용하여 효율적인 식물 표현 벡터를 만드는 방법도 고정적인 패턴이 부족하다는 것을 알 수 있어 더 연구할 만하다.

7 유전자 전략

지금까지 대부분의 유전자 변형 연구는 단일 외원 유전자를 수용체 식물로 옮기는 것이다. 그러나 때로는 단일 유전자 발현 강도 또는 단일 작용 메커니즘이 부족하여 이상적인 유전자 변형 식물을 얻을 수 없는 경우도 있다. 둘 이상의 협동유전자를 동시에 식물로 옮기면 단일 유전자 전환보다 더 좋은 결과를 얻을 수 있다. 이 전략은 이미 병충해에 저항하는 유전자 변형 식물을 재배하는 데 적용되었다. 예를 들어, 항충 유전자의 항충 스펙트럼과 작용 메커니즘에 따라, 두 가지 기능을 보완하는 유전자를 선택하여 전달체 건설을 하고, 일정한 방식으로 두 가지 항충 유전자를 동시에 식물로 옮길 수 있다. 왕위 등은 렉틴 유전자와 단백질효소 억제제 유전자를 동시에 면화로 옮겨 2 가 항충 유전자를 함유한 형질 전환 식물을 얻었다. Barton 등은 Bt 살충단백질 유전자와 전갈독소 유전자를 동시에 담배로 옮기는 등 항충성과 해충의 항성 방지 능력 (특허) 을 크게 높였다. 내병성 방면에서 우리 연구실의 블루해연 등은 베타-1,3- 글루칸효소 유전자와 키틴효소 유전자를 함유한 쌍가 식물 표현 벡터를 구축해 유채와 면화에 도입했다. 결과는 형질 전환 식물이 명백한 질병 저항성을 가지고 있음을 보여줍니다. 최근 풍도영, 이보건 등은 2 ~ 3 개의 항진균유전자와 hpt 유전자를 한 벡터에 연결하고, 두 개의 항충유전자와 bar 유전자를 다른 벡터에 연결하고, 유전자총으로 벼식물에 도입했다. 그 결과 야생 벼 후손 식물의 70% 는 모두 도입된 외원 유전자 (6 ~ 7 개) 를 포함하고 있으며, 도입된 외원 유전자는 게놈의 한 개 또는 두 개의 부위에 통합되는 경향이 있는 것으로 나타났다.

일반적으로 일반 변환은 25kb 보다 큰 외부 DNA 조각을 식물 세포로 가져올 수 없습니다. 식물의 양적 특성 유전자, 항병 유전자 등과 같은 일부 기능 관련 유전자는 대부분' 유전자 클러스터' 형태로 존재한다. 100kb 보다 큰 DNA 덩어리 (예: 식물 염색체에 자연적으로 존재하는 유전자 클러스터 또는 일련의 관련이 없는 외원 유전자를 식물 게놈의 같은 부위에 도입한다면, 여러 유전자 제어의 우량성이 나타나거나 광보 항충과 항병을 일으킬 수 있으며, 수용체 세포에 새로운 생물 분자를 생성하는 새로운 대사 경로를 부여한다. 또한 큰 게놈이나 유전자 클러스터의 동시 삽입도 유전자 조작으로 인한 위치 효과를 어느 정도 극복하고 유전자 침묵 등 좋지 않은 현상의 발생을 줄일 수 있다. 최근 미국의 Hamilton 과 중국의 류요광은 DNA 의 큰 조각을 복제하고 농균의 도움으로 직접 식물로 전환하는 차세대 전달체 시스템인 BIBAC 와 TAC 를 개발했다. 이 두 가지 벡터는 유전자의 비트맵 복제를 가속화할 수 있을 뿐만 아니라 다중 유전자 통제하에 있는 품종 개량에 잠재적인 응용가치를 가지고 있다. 현재, BIBAC 와 TAC 벡터가 다중 유전자 변환에서의 응용 연구는 이제 막 시작되었다.

8 스크리닝 마커 유전자의 이용 및 결실

스크리닝 마커 유전자는 유전자 변형에서 형질 전환 세포 (또는 개인) 를 많은 비 형질 전환 세포에서 스크리닝 할 수있는 마커 유전자입니다. 이들은 일반적으로 유전자 변형 세포가 어떤 선택제에 내성이 있는 산물을 만들어 유전자 변형 세포가 이런 선택제가 첨가된 배양기에서 정상적으로 자라게 하는데, 유전자 변형 세포가 항성 부족으로 인해 이런 선택제에 민감하게 반응하여 성장, 발육, 분화를 할 수 없다. 벡터를 만들 때, 선별 표시 유전자는 목적 유전자의 한쪽에 연결되며, 각 유전자에는 자체 유전자 조절 시퀀스 (예: 시동자, 종결자 등) 가 있다. ). 현재 일반적으로 사용되는 선별 마커 유전자는 항생제 항성효소 유전자와 제초제 항성효소 유전자의 두 가지 주요 범주로 나뉜다. 전자는 특정 항생제에 내성을 가질 수 있고, 후자는 제초제에 내성을 가질 수 있다. 가장 일반적으로 사용되는 항생제 항성효소 유전자는 NPTII 유전자 (신마이신인산 전이효소 생성, 항성카나마이신), HPT 유전자 (조류마이신인산 전이효소 생성, 항성조타마이신 생성), Gent 유전자 (항성겐다마이신) 입니다. 일반적으로 사용되는 제초제 내성 유전자는 EPSP 유전자 (5- 에놀 아세톤산 무모초산 -3- 인산합효소, 항초간), GOX 유전자 (초간 산화효소 생성, 초간 분해), bar 유전자 (PPT 아세틸 전이효소 생성, 항병암모니아

위의 1, 2,3,5,6 은 모두 주목할 만하다. 특히 5 는 세포 밖으로 분비하고 싶기 때문이다. 골격 벡터는 PB I 12 1 일 수 있으며, 그 위에서 유전자형을 바꿀 수 있습니다.

다음은 복제 단계입니다. 비교적 간단합니다.

1 먼저 목적유전자의 효소를 얻어서 개조된 벡터에 연결한다.

2. 플라스미드를 대장균 DH5a 로 옮겨 증폭한다.

3. 증폭된 플라스미드를 식물 세포로 옮겨 표현한다.

4. 뿌리를 모은 세포외 배양기는 단백질의 표현과 분비를 검출한다.

운반체를 개조하는 단계에 관해서는 질문에 대답하면 간단히 말해 보세요. 결국, 만약 당신이 정말로 운반체를 만들었다면, 당신은 스스로 회사를 개설할 수 있습니다.