제한 내체 효소는 제한 효소 인식 서열이라는 DNA 서열이나 인근 특정 부위에 특이하게 결합하여 이중 체인 DNA 를 절단할 수 있다. 세 가지 범주로 나눌 수 있습니다: 클래스 I 와 ⅲ 효소는 동일한 단백질 분자에서 절단과 변형 (메틸화) 을 모두 가지고 있으며 ATP 의 존재에 의존합니다. 클래스 I 효소는 인식 부위와 결합하여 인식 부위에서 멀지 않은 DNA 를 무작위로 절단하고, 클래스 III 효소는 식별 부위에서 DNA 분자를 절단한 다음 기질에서 분해한다. II 는 두 가지 효소로 이루어져 있습니다. 하나는 특정 뉴클레오티드 서열을 절단하는 제한적인 내체 효소입니다. 다른 하나는 같은 인식 서열을 수식하는 독립 메틸화 효소이다. II 종류의 제한적인 내체효소는 이미 분자 복제에 광범위하게 적용되어 DNA 재구성의 기초이다. 대부분의 유형 II 제한 내체효소는 길이가 4 ~ 6 개의 뉴클레오타이드인 회문 대칭의 특정 뉴클레오티드 시퀀스 (예: EcoRⅰI 는 6 개의 뉴클레오티드 시퀀스: 5'-G↓AATTC-3') 를 인식하고, 소수의 효소는 더 긴 서열이나 퇴화 서열을 식별한다. 인식 시퀀스에서 ⅱ 효소의 일부 절단 부위는 대칭 축에서 잘려 평평한 DNA 조각 (예: SMA I: 5'-CCC GGG-3') 을 생성합니다. 일부 절단 부위는 대칭 축의 한쪽에 있기 때문에 DNA 조각에는 접착단이라고 하는 단일 체인 돌출 끝이 있습니다. 예를 들어, ECOR I 는 식별 시퀀스를 절단하고 두 개의 상호 보완적인 점성 끝을 생성합니다.

5' ... g ↓ aa TTC ... 3' → 5' ... gaat TC ... 3'

3' ... CTT aa ↑ g ... 5' → 3' ... CTT AAG ... 5'

DNA 순도, 완충액, 온도 조건, 제한 내체효소 자체는 제한 내체효소의 활성화에 영향을 미친다. 대부분의 제한 효소는 RNA 나 단일 가닥 DNA 의 영향을 받지 않는다. 미량의 오염물질이 제한적인 내체효소 저장액에 들어가면 추가 사용에 영향을 주므로 제한 내체효소를 흡수할 때마다 새로운 이동기 헤드를 사용해야 한다. 두 가지 제한 내체 효소를 사용한다면 각자의 최적 소금 농도를 제공하는 데 주의해야 한다. 만약 그들이 같은 완충액을 사용할 수 있다면, 그들은 동시에 가수 분해될 수 있다. 다른 소금 농도가 필요하다면 먼저 저염 농도의 제한 내체효소를 사용하고 소금 농도를 조정한 다음 고염 농도의 제한 내체효소로 가수 분해해야 한다. 또는, 첫 번째 효소가 완성된 후, 같은 부피의 페놀/클로로포름으로 추출하여 0. 1 배 부피의 3mol/LNaAc 와 2 배의 부피의 무수에탄올을 넣고 골고루 섞은 다음-70 C 에서 30 분 동안 냉장 보관하여 원심합니다