DNA 백신의 개발은 유전자 공학 기술이 백신 연구에서 또 하나의 중대한 돌파구이다. 항원 유전자를 진핵 표현 전달체에 재조합하여 직접 또는 포장을 체내에 주사하여 해당 항원을 표현하여 기체가 면역반응을 일으키도록 유도한다. 이것은 발전 잠재력이 있는 새로운 백신 [2] 이다.
DNA 백신; 수의사
최근 몇 년 동안, 많은 가축바이러스성 전염병은 더 이상 백신이나 약독 백신과 같은 전통 백신으로 예방할 수 없다. DNA 백신의 출현으로 이 상황이 개선되었다. 바이러스, 세균, 기생충과 같은 다양한 종류의 항원 유전자를 인코딩하는 플라스미드 DNA 는 포유류, 조류, 물고기와 같은 척추 동물에서 강하고 지속적인 면역 반응을 일으킬 수 있다. DNA 백신은 생백신, 약독 백신, 서브 유닛 백신에 이어' 3 세대 백신' 으로 불리며 광범위한 발전 전망을 가지고 있다.
1 DNA 백신 소개
DNA 백신은 핵산 백신이나 유전자 백신이라고도 하며 면역원이나 면역원과 관련된 진핵 표현 플라스미드 DNA (때로는 RNA) 를 코드화한다. 그것은 특정 경로를 통해 동물의 체내에 들어가 숙주 세포에 의해 번역돼 항원 단백질을 표현하여 기체가 비특이성과 특이성 면역반응을 일으키도록 자극함으로써 면역 보호 작용을 할 수 있다.
DNA 백신은 많은 장점을 가지고 있다. ①DNA 접종 벡터 (예: 플라스미드) 는 구조가 간단하고, 정제 플라스미드 DNA 의 과정이 간단하기 때문에 생산 비용이 낮아 대규모 생산에 적합하다. ②DNA 분자 복제는 비교적 쉬워서 필요에 따라 언제든지 DNA 백신을 업데이트할 수 있다. ③DNA 분자는 매우 안정적이어서 동결 건조 DNA 백신을 만들 수 있다. 사용할 때 소금 용액에서 원래의 활성성을 회복하여 운송과 보관을 용이하게 할 수 있다. ④ 전통적인 백신보다 더 안전하다. DNA 백신은 약독 백신과 같은 면역원성을 가지고 있지만 세포 독성 T 림프세포를 활성화시켜 세포 면역을 유도할 수 있다. 그러나 DNA 서열은 단일 바이러스 유전자만 코딩하기 때문에 독성 역전의 가능성은 거의 없기 때문에 약독 백신 (Daviset Al., 1999) 이 증가할 위험은 없으며 DNA 백신의 항원 관련 시계가 면역체계에서 비교적 안정적이기 때문에 약독 백신이나 서브 유닛 백신과 함께 사용할 수 있습니다. (데이비드 아셀, Northern Exposure, Northern Exposure, Northern Exposure) ⑤ 플라스미드 자체는 보조제로 사용될 수 있으므로 DNA 백신으로 보조제를 사용하지 않으면 비용을 절감하고 사용하기 쉽습니다 (Babiuk 등,1999). ⑥ 다양한 플라스미드 DNA 를 간단하게 혼합하여 생화학 특성이 유사한 항원 (예: 같은 병원체 출신의 다른 독주) 이나 1 병원체 항원을 다가 백신으로 결합하여 1 DNA 백신이 여러 표위를 위한 면역 보호를 유도해 DNA 백신 생산의 유연성을 크게 높인다
DNA 백신의 응용
2. 1. 1 pseudorabies 바이러스 (PRV) 는 PRVgC 또는 gD 유전자를 인코딩하는 플라스미드 DNA 면역 돼지를 사용하여 보호 항체 및 세포 면역을 유도한다. GB, gC, gD 를 인코딩하는 다양한 플라스미드 DNA 를 혼합하여 면역반응을 유도하는 것이 더 효과적이다 (Gerdts V 등,1997; Rooij E M 등 1998).
2. 1.2 돼지인플루엔자 바이러스 (HIV) 마클링 등 (1998) 실험 결과 HIV 1 그루코드응고소 (HIV
2. 1.3 돼지 호흡과 생식증후군 바이러스 (PRRS)PRRS PRRS 유전자 단편 ORF5 로 인코딩된 주요 포막당 단백질 GP5 는 이 바이러스의 세 가지 주요 구조 단백질 중 하나이다. ORF5 유전자를 함유한 플라스미드 DNA 는 돼지가 특이성의 GP5 중화 항체 생성을 유도할 수 있다. 또한 면역돼지의 외주혈단핵세포는 GP5 재조합 단백질의 존재 하에서 전환반응을 일으킬 수 있는데, 이는 GP5 특이성 세포면역 (Pirzadeh B 등 1998) 이 발생했음을 보여준다. 맹 (2000) 은 GP5 유전자를 거세포 바이러스 (CMV) 의 초기 시동자 통제하에 진핵 표현 플라스미드에 복제해 DNA 백신을 준비하고, 면역돼지 이후 항체 생성을 유도해 실험실 공독 후 좋은 보호 효과를 보이고 있다.
2. 1.4 구제역 바이러스 (FMDV) 는 FMDV 전체 길이 게놈 cDNA 를 입자로 복제하고, 핵캡시드 단백질 VP 1 을 코딩하는 세포 결합부위의 DNA 서열을 제거하여 근육 내 또는 피내 주사를 위한 플라스미드 DNA 를 구축합니다. 첫 면역 2 ~ 4 주 후, 모든 돼지는 특정 바이러스와 항체 (Ward G 등, 65438) 를 생산할 수 있다
2. 1.5 돼지 열병 바이러스 (CSFV) 여흥룡 등 (2000) 은 CSFV 주요 보호성 항원 E2 유전자의 4 가지 진핵 표현 플라스미드를 구축했다. 쥐면역실험 결과 E2 유전자의 다양한 기능영역이 유전자 백신의 면역반응에 큰 영향을 미친다는 사실이 드러났다. 신호 펩타이드 서열을 함유 한 E2 유전자는 특정 면역 반응을 유도 할 수 있으며, 막 횡단 영역 서열이없는 E2 유전자는 막 횡단 영역 서열을 함유 한 E2 유전자보다 강한 면역 반응을 유도 할 수 있으며, 신호 펩타이드 서열이없는 E2 유전자는 CFSV 특이 면역 반응을 유도 할 수 없다. 공독 보호 실험 결과 면역토끼는 최소 감염량 (MID) 으로 최소 10 제 돼지 역병 약독 백신 (HCIV) 에 저항할 수 있는 것으로 나타났다. 면역돼지는 치사량의 CFSV 석문주에 저항할 수 있다.
2.2. 1 BRSV G 유전자로 제작된 우호흡기합세포 바이러스 (BRSV) DNA 백신은 송아지가 바늘이 없을 때 피내나 근육 주사보다 면역반응이 더 강하다.
2.2.2 소 포진 바이러스 (BHV) 는 BHV 에 의해? 1 gD 유전자 플라스미드 DNA 백신 면역소는 고 중화 항체. 공격 실험 결과 면역군의 바이러스 방출량은 비면역군 (schrijver R S et al, 1997) 보다 현저히 낮은 것으로 나타났다. 이 백신은 근육이나 피내 주사를 통해 면역반응을 유도할 수 있다. 하지만 피내 주사로 인한 면역반응이 더 강하다 (맹소나무 등, 2000). -응?
2.2.3 근육 주사는 BVDV 1 주요 당 단백질 E2 의 플라스미드 DNA 를 발현하는 소 바이러스성 설사 바이러스 (BVDV) 로 바이러스와 항체 및 항원 특이성 세포 증식반응을 일으킨다. 면역 후 16 주간 공독 실험을 실시한 결과, 면역소가 BVDV 1 및 2 혈청중화 항체 (Cox G J 등, 1993) 에 대한 강한 메모리 항체 반응을 일으킬 수 있다는 사실이 밝혀졌다. -응?
2.3. 1 뉴캐슬병 바이러스 (DNV) 사카구치 등 (1996) NDV F 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입, F 유전자 발현은 거대 세포 바이러스 조기 증강 인자와 닭 베타? 근동 단백질 프로모터 제어. 1 주령닭 근육 주사 재조합 플라스미드 후 선형 플라스미드를 주사하는 2/5 닭과 선형 플라스미드와 리포좀 전달제의 혼합물을 주사하는 4/5 닭은 높은 수준의 항 F 단백질 항체 을 생산하고 폐쇄 루프 플라스미드를 주사하는 닭은 항체 을 생산할 수 없다. 면역 9 주 후, 체내에 항체 실험닭이 있어 치사량 NDV 의 공격에 저항할 수 있다. -응?
2.3.2 전염성 후두 기관지염 바이러스 (ILT) 는 전염성 후두 기관지염 바이러스 왕강주 gB, gC, gD 유전자를 함유한 재조합 진핵 표현 플라스미드와 빈 전달체 플라스미드를 그룹화하여 병아리를 주입해 공독 후 면역 보호 효과를 관찰한다. 그 결과, 재편성 입자가 면역반응을 유도하고 면역보호율이 79% 에 달하는 것으로 나타났다. 이 유전자 백신은 1 보충제로 ILV 예방에 사용될 수 있다. -응?
2.3.3 고병원성 조류인플루엔자 바이러스 로빈슨 등 (1993) 은 먼저 DNA 백신을 닭에 적용했다. 고병원성 조류인플루엔자 바이러스 H7N9 그루의 혈응고소 (HA) 유전자를 코딩한 플라스미드 (DNA) 는 다른 경로 (정맥 주사, 복강 주사, 피하주사) 를 통해 3 주령의 닭을 면역시켜 치사량 H7N9 바이러스의 코 내 공격에 대한 50% 보호를 제공한다. Fyna 등 (1993) 코드 H7? HA 플라스미드 DNA 는 정맥주사, 근육주사, 피하주사, 눈방울, 낭내 주사, 코면역 3 주령닭을 통해 면역된다. 4 주 후에 2 차 면역을 한다. 6 주째 치사량인 H7N7 공격을 할 때 면역닭의 생존율은10 ~ 63% 였고 대조군의 생존율은 2% 에 불과했다. 이 가운데 정맥과 근육 주사 등 다양한 경로의 면역효과는 근육 주사, 눈두덩, 법씨낭, 코방울 등 단일 경로보다 우수하다. 코디해리 등 (1997) 이 H5 로 코드화됩니까? 0.25, 0.5, 65, 438+0.5 또는 65, 438+00 μ g 의 HA 플라스미드 DNA 면역계, 4 주 후 100LD? Ty/lre/83 독주의 50% 가 코내 면역공격을 받아 0.25μg DNA 까지 낮았고 면역닭의 50% 가 생존할 수 있었다. 1, 5, 10 μg 의 복용량은 치사량 바이러스의 공격을 완전히 막을 수 있다. DNA 백신은 또한 치사량의 항원 돌연변이에 95% 의 보호를 제공하여 DNA 독감 백신이 광범위한 발전 전망을 가지고 있음을 증명할 수 있다.
우리나라가 개발한 H7 아형 혈응고소 유전자 DNA 백신은 극소량의 복용량으로 면역보호반응을 유도하여 체내 동원저독 고병원성 조류인플루엔자 바이러스의 감염과 해독을 효과적으로 차단할 수 있다. H5 아형 혈응고소 DNA 백신은 면역원성이 우수하며, 근육 주사는 동원강독 공격에 대한 면역보호를 받을 수 있으며, 면역보호 생닭의 해독작용을 효과적으로 차단할 수 있다.
3 DNA 백신의 안전성은 DNA 백신 사용의 안전성에 대해 의심을 품고 있지만, DNA 가 숙주 세포의 염색체에 통합되어 삽입 돌연변이를 일으킬 수 있다는 우려가 있지만, 많은 연구결과는 돌연변이를 삽입하는 현상을 발견하지 못했다. 플라스미드 DNA 는 동물의 체내에서 천천히 분해되어 동물의 자체 면역 (진화란 등, 1998) 을 일으키지 않으며 난자와 정자와 함께 후대에 전달되지 않는다. 생물학적 사슬이 다른 종에 진입함에 따라 멸종되고 환경에 대한 오염이 적기 때문에 그 위험은 현재의 백신보다 훨씬 낮다.