현탁 세포 형질 감염 성능이 우수하다: 세포 형질 감염 양성율은 일반적으로 75% 이상이며 유전자 녹아웃 효율은 80% 이상이다.
세포 독성이 매우 낮다: 형질 감염된 세포 사망률 (10% 미만) 은 세포 독성이 실험 결과에 미치는 영향을 크게 감소시킨다.
형질 감염 세포의 범위가 넓어서 대부분의 공중부양 세포가 이상적인 형질 감염 결과를 얻을 수 있다.
제품 소개
RFectSP 현탁 세포 소핵산 감염 시약 는 우리 연구개발팀이 RFectPM 원대 세포 소핵산 감염 시약 의 기초 에서 연구 성공 한 일종 의 정지 세포 소핵산 감염 을 위한 시약 이다. RFectSP 는 siRNA, 반의RNA, microRNA 와 같은 200bp 내의 작은 분자 RNA 와 DNA 를 전염시키는 데 사용할 수 있으며, 대부분의 공중부양 세포를 감염시킬 수 있습니다. 현재, 현탁 세포의 핵산 전염은 국내외 연구에서 뜨거운 이슈이며, 시장에는 실제로 효과적인 현탁 세포 소핵산 상용화 시약 감염도 부족하다. RFectSP 는 대부분의 공중부양 세포를 효율적으로 전염시켜 이상적인 유전자 녹아웃 효과를 얻을 수 있다. 대부분의 사망률 세포에 대해 RFectSP 의 형질 감염 양성율은 75% 이상이며 형질 감염 세포의 감염률은 10% 미만이다. RFectSP 의 사용도 매우 간단합니다. 먼저 실온에서 sRNA 와 RFectSP 를 섞은 다음 SiRNA 와 RFECTSP 의 혼합물을 배양기가 들어 있는 세포에 직접 첨가한다. 혈청은 형질 감염 효과에 영향을 주지 않으므로 배양기를 의도적으로 추가하거나 교체할 필요가 없다. 우리는 이미 RFectSP 공중부양세포 소핵산이 시약 재료합성과 시약 준비에 의한 국제특허를 신청했고, PCT 를 통해 세계 여러 나라와 지역을 포괄하고 있다.
절차: 이 설명서는 24 홀 배양판의 형질 감염 실험에 적용된다. 다른 사양의 배양판 사용량에 대해서는 각 구멍의 사용량과 부피를 보여주는 다음 표를 참조하십시오.
A. 세포접종: 전날에 세포를 접종하고, 구멍당 500 μl 배양기를 감염시킬 때 세포 밀도가 30 ~ 50% 로 항생제를 사용하지 않도록 한다.
B.SiRNA-rfectsp 혼합물의 제조:
1.6pmol siRNA 는 50μl 무혈청 배양기로 희석되었다.
2.2μl RFectSP 는 50μl 무혈청 배양기로 희석되었다. 부드럽게 5 분 동안 실내 온도에서 5 분 동안 부화하십시오. 주의: 반드시 25 분 안에 세 번째 단계를 완성해야지, 너무 오래 끌지 마라.
3. 부화 5 분 후 RFectMN 희석제 (총 부피 100μl) 로 siRNA 5min 을 희석한다. 부드럽게 섞어서 실온에서 20 분 동안 부화한다.
C. 배양된 세포에 혼합물을 넣는다 (완전 배양기 배양):
1. 100μl 의 혼합물을 0.5ml 배양세포가 포함된 배양구멍에 넣는다. 배양판을 가볍게 5 분 정도 흔들고 5 분간 충분히 흔들어주세요.
2.37 C 에서 48-72h 를 배양하여 유전자 억제 효과를 검출하다. 필요한 경우 세포가 4-6 시간 후에 배양기를 교체할 수 있지만 꼭 필요한 것은 아니다. 부화 시간의 길이는 세포 유형에 따라 다릅니다.
유전자 자체와 분석 방법을 방해하다. 실험에 대해 서로 다른 부화 시간을 설정하여 최적의 부화 시간을 결정할 수 있다.
형질 감염 실험의 최적화: 형질 감염 효율을 높이기 위해서는 형질 감염 조건, 특히 처음으로 최적화하는 것이 가장 좋다. 예: 24 홀 배양판, siRNA 및 RFectSP 시약 사용 조정 SiRNA 의 복용량은 6-60 pmol 사이 (최종 농도 10- 100 nm), RFectSP 시약 복용량은1.0-;
형질 감염 실험 요점
L 전염시 항생제를 사용하지 마십시오. 그렇지 않으면 세포 사망이 증가할 수 있습니다.
L 1 차 실험에서 siRNA 의 복용량은 10nM, 30nM, 50nM, 100 nM 의 최종 농도로 설정되고 후속 실험은 실험 결과에 따라 수정된다.