2) 테스트 할 샘플, 단열 반응을 추가하십시오. 샘플의 항원은 고체상 항체 결합으로 고체상 항원-항체 복합물을 형성한다.
세척하여 다른 결합되지 않은 물질을 제거하다.
3) 효소 항체, 단열 반응을 첨가하십시오. 고체상 면역 복합물의 항원과 효소 표지의 항체 결합, 결합되지 않은 항원은 철저히 세탁된다.
이때 고체 운반체에 운반되는 효소의 양은 샘플의 항원 양과 관련이 있다.
4) 기질 발색을 추가합니다. 고체상 효소는 기질을 유색 산물로 촉매한다. 샘플의 항원 양은 색상 비교를 통해 측정할 수 있다.
임상 실험에서 이 방법은 HBsAg, HBeAg,
AFP, hCG 등. 검출 된 항원에 대한 항체 만 얻으면 고상 운반체를 싸서 효소 결합을 준비하는 데 사용할 수 있습니다.
항체 공급원이 항혈청이라면 다양한 종류의 동물에서 항체 포접과 효소 표지를 채취하는 것이 좋다.
단일 복제 항체 를 사용하는 경우 일반적으로 항원에 따라 클러스터를 결정하는 두 개의 단일 복제 항체 팩을 각각 고체상으로 선택하는 것이 일반적입니다.
이런 이중점 샌드위치법은 고도의 특이성을 가지고 있어, 측정할 샘플과 효소를 표시하는 데 사용할 수 있다.
항체 함께 부화하는 것은 진일보한 검사에 쓰인다.
1 단계 측정에서 샘플에서 검출된 항원의 함량이 높을 때 여분의 항원을 각각 고체상 항체 및 효소로 표시한다.
항체 조합은 더 이상 샌드위치 복합물을 형성하지 않습니다. 이는 침전반응 중 항원 과다 현상과 유사하며, 반응할 때
발색된 흡수값 (항원 과다 영역) 과 표준 곡선 (항체 과다 영역) 은 일정한 항원 농도를 가지고 있다.
흡광도 값은 동일합니다 (1.3.2, 그림 1-4 참조). 정상적인 방법으로 측정하면 결과가 실제 함량보다 낮아집니다.
이미지는 갈고리 효과라고 한다. 표준 곡선이 최고점에 도달한 후 아래로 구부려 갈고리 모양으로 구부러지기 때문이다. 연계 효과가 심각하다.
그러나 반응은 심지어 색을 드러내지 않아 가짜 음성 결과를 초래할 수도 있다. 따라서 1 단계 시약 측정 샘플의 함량이 이상할 수 있습니다.
물질 (예: 혈청 HBsAg, AFP, 소변 중 hCG 등) 을 추가할 때. ), 측정 가능한 범위의 가장 높은 값에주의를 기울이십시오.
높은 친화력 단일 복제 항체 준비로 이러한 시약 제작은 훅 효과를 약화시킬 수 있다.
HBsAg 의 A 결정 클러스터와 같이 측정된 분자의 다른 부위에 동일한 결정 클러스터가 여러 개 있는 경우
고체상 및 효소 결합물은 이 결정에 대한 동일한 단일 복제 항체 (single cloning package) 를 가지고 있지만, HBsAg 를 검출할 때는 아형에 주의해야 한다.
질문: HBsAg 에는 ADR, adw, ayr, ayw4 의 네 가지 아형이 있습니다. 각 아형은 같은 결정반응을 가지고 있지만.
성별, 이것도 단일 복제 항체 샌드위치를 만들 때 주의해야 할 문제이다.
이중 항체 샌드위치법이 항원을 검출하는 또 다른 주의점은 류머티즘 인자 (RF) 의 간섭이다. RF 는 자체 항체, 주로 IgM 형으로 많은 동물 IgG 의 Fc 세그먼트와 결합할 수 있습니다. 이중 항체 샌드위치법 검사용 혈청 샘플에 RF 가 포함되어 있다면 항원 성분으로 사용할 수 있으며 고체상 항체 및 효소 표준 항체 결합과 함께 위양성 반응이 나타난다. F(ab') 또는 Fab 조각은 제거되기 때문에 효소 결합물의 시약 역할을 합니다.
이중 항체 샌드위치 ELISA 시약 (ELISA) 가 RF 의 영향을 받는지 여부가 평가지표로 등재됐다.
이중 항체 샌드위치법은 2 가 이상의 고분자 항원 측정에 적용되지만, 2 점 샌드위치를 형성할 수 없기 때문에 반항원과 소분자 단가 항원 측정에는 적용되지 않는다.