感受态细胞制备常用方法是CaCl2法。
感受态细胞:是指用理化方法诱导细胞,吸收周围环境中的DNA分子,使其处于最适摄取和容纳外来DNA的生理状态。
CaCl2法制作感受态细胞的步骤:
1.将大肠杆菌DH5a感受态细胞接种于普通LB平板上, 37℃恒温培养箱培养12-16h,挑取单个菌落,接种至10 mLLB普通肉汤中,37空气摇床震荡培养过夜。
2.取0.25 mL过菌液,加入25 mL37℃预热的LB培养基中,扩大培养2-3h,使细菌生长至对数期(此时测定细菌培养液OD600为0.5左右)。
3.转移至50mL离心管,冰上静置30 min后4000 r/min,离心10 min,倒掉液体,倒置lmin,加入5 mL预冷的0.1 mol/LCaCl2重悬管底细胞。
4.然后再次冰浴30min后4000r/min离心10min,倒掉液体,倒置lmin,再次加入1 mL预冷的0.1 mol /L CaCl2,悬浮细胞沉淀,冰上分装成100uL/管,4℃沉淀过夜,吸掉上清50μL,加入50μL 50%的甘油,-70"C 保存备用。
制作原理:通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。
以上内容参考:百度百科-感受态细胞