대장균 O 157:H7 로 대장균 O 157:H7 검출

(a) 국가 표준 방법 (일반 방법)

1, 농축 배양

2. 분리

3. 식별

(2) 금 표준 시험지법

중국 인민과 보건부가 자주 배포하는' 중국 장출혈성 대장균 O 157: H7 감염성 설사 응급처치 방안' 에 이런 방법이 명시되어 있다.

샘플은 특별한 사전 농축과 증균을 거친 후 120ul 증균 배양액을 가져와 시험지 클립의 샘플 슬롯에 넣는다. 모세관 작용으로 인해 샘플이 반응 영역으로 이동하는데, 반응 영역에는 콜로이드 골드 멍에와 결합된 특수 항체 (E.coliO 157:H7 항체) 가 포함되어 있습니다. 샘플에 항원이 있으면 금표 항체 결합과 항원 항체 복합물을 형성하여 질산섬유소를 따라 고정화 항대장균 157:H7 항체 지역 (T 구역) 으로 이동하고, 금표 면역복합물은 해당 지역의 항항체 특이성과 결합하여 가시선을 형성한다. 다른 샘플은 계속해서 막의 끝으로 이동하다가 결국 폐기물 풀로 들어가 폐기되었다.

반응구역에는 금표가 결합된 특허 항원 (색상 지시제) 도 포함되어 있는데, 샘플에 대장균 157:H7: H7 항원이 있든 없든 이 항원은 샘플에 의해 씻겨진다. 금표 제어 지시제는 막을 통해 음성 제어 영역으로 이동하고 특허 항체 와 결합하여 보이는 선을 형성한다. 샘플에 대장균 157:H7: H7 항원이 있든 없든 대조군 (C 구역) 에 대조선을 형성하여 검사가 정상적으로 진행되도록 합니다.

증균방울을 8- 10 분 정도 더하면 시험지 C 구역과 T 구역에 뚜렷한 선이 있는지 관찰한다. C 구역과 T 구역에 모두 보이는 선이 있으면 결과는 양성이다. C 구역 유선, T 구역 무선, 결과는 부정적입니다. C 구역이 무선이라면 T 구역에 전선이 있든 없든 실험은 무효이다.

(3) 등 그리드 검출 시스템

ISO-GRID 검사 시스템은 소수성 망막 (HGMF) 기반 필터링 시스템입니다. 시스템은 1600 개의 작은 정사각형이 있는 이 필터를 사용하여 미생물을 탐지하거나 계산합니다.

먼저 5um 스테인리스강 프리필터를 사용하여 희석된 샘플을 필터링하여 미생물 분석 오류를 일으킬 수 있는 샘플 잔류 입자를 필터링합니다.

그런 다음 샘플은 수돗물막을 통해 여과됩니다. 그런 다음 필터를 특정 한천 배양판에서 배양하여 대상 미생물을 탐지한다. 배양이 완료되면 막에서 대상 미생물을 탐지하고 양성 영역의 수를 기록한다.

여과막은 한천 배양기의 색깔에 물들지 않아 미생물을 쉽게 구분하고, 감정하고, 계산할 수 있게 한다. 이 방법은 빠르고 간편하며 재현성이 좋다. 대장균 O157: H7 외에도 살모넬라, 효모, 곰팡이, 대장균 군, 대장균 검출 및 카운트에도 적용됩니다.

(4) 단일 클론 효소 결합 면역 흡착 분석법의 스크리닝 방법

이 방법은 모든 식품에 대장균 157: H7 이 있는지 검사하는 것입니다. 확인 실험이 아닙니다. 실험에 사용된 단일 복제 항체 때문에 소량의 비대장균 157: H7 과 교차 반응할 수 있습니다.

양성 검역 결과는 객관적이어야 하며 450nm 필터가 장착된 광도계로 테스트해야 한다. 양성 결과는 음성과 양성 품질 관리 제품이 모두 허용 가능한 광학 밀도 판독값을 가지고 있는 경우에만 유효합니다.

원리 대장균 157:H7 의 검출은 이성 단일 복제 항체 (EIA) 를 이용한 효소 면역 측정 (EIA) 에 기반을 두고 있다. 항대장균 157:H7 항원의 단일 복제 항체 포장으로 폴리스티렌 마이크로공의 내부 표면을 감싸고 샘플과 대조를 미공에 넣는다. 샘플에 대장균 157:H7 항원이 있으면 구멍에 흡착된 특이항체 에 흡착된다. 세탁 후 결합제를 넣고 항체 흡착된 대장균 157:H7 항원과 결합한다. 구멍을 다시 헹구어 결합되지 않은 접착제를 제거한 다음 효소 기질을 넣는다. 종료 용액으로 반응을 끝내면 파란색이 노란색으로 변한다. 샘플에 대장균 157:H7 항원이 있는지 여부는 색상에 의해 생성되는 빛의 밀도에 따라 달라집니다.

(e) 자동 효소 결합 형광 면역 측정법 시스템 (VIDAS) 의 스크리닝 방법

대장균 157:H7 의 항원 식별은 VIDAS 기기의 효소 연합 형광 면역 분석에 기반을 두고 있다. 이동기와 같은 설비는 고체상 용기 (SPR) 로, 분석에서 고체상과 액체 흡수제 역할을 한다. SPR 가방은 고도의 특이성을 가진 단일 복제 항체 혼합물이다. 시약 스트립에 일정량의 증균육수를 넣고 육수 속의 혼합물은 특정 시간 동안 SPR 안팎에서 순환한다. 대장균 157:H7 항원이 존재하는 경우 SPR 패킷의 단일 복제 항체 결합과 결합되고 다른 결합되지 않은 화합물은 씻겨집니다. 알칼리성 인산효소와 결합된 항체 SPR 안팎에서 순환하며 SPR 내벽에 결합된 대장균 157:H7 항원과 결합하여 결합되지 않은 결합물은 최종 세척 단계에서 씻겨집니다. 기질 -4- 메틸 우산 케톤은 SPR 벽의 효소에 의해 형광산물 -4- 메틸 우산 케톤으로 전환된다. 형광 강도는 광학 스캐너에 의해 측정됩니다. 실험 결과는 컴퓨터가 자동으로 분석하고 형광 테스트에 기반한 테스트 값을 표준과 비교한 다음 테스트된 각 샘플에 대한 양성 또는 음성 결과 보고서를 인쇄합니다.

(6) 대장균 157:H7 빠른 효소 접촉 반응 발색 배양기법.

빠른 효소 접촉 반응은 세균이 생장 번식 과정에서 특정 효소를 합성하고 방출할 수 있는 것을 바탕으로 효소의 특성에 따라 관련 배양기에서 해당 기질과 지시제를 선택하고 배합하는 것이다. 세균반응 후 뚜렷한 색상 변화에 따라 분리될 의심스러운 균주를 확정해 반응 측정 결과는 세균의 빠른 진단에 도움이 된다. 이 기술은 전통적인 세균 분리와 생화학 반응 유기결합을 통해 검사 결과를 시각화하여 미래의 미생물 검사의 중요한 발전 방향이 되었다.

(7) DNA 프로브 기술

DNA 프로브 기술은 새로 발전한 특이하고 민감하며 빠른 검출 방법이다. 그러나, 일정 비율의 위양성 반응으로 인해 모든 양성 결과는 반드시 표준 양성 방법을 통해 확인되어야 한다.

원리는 이성 DNA 프로브로 대장균 157:H7: H7 의 리보솜 RNA(rRNA) 를 검출한다. 사전 농축, 선별적 농축, 후부를 거쳐 샘플을 측정하여 세균을 용해시킬 것이다. 대장균 157:H7: H7 의 표기된 DNA 프로브를 넣어 액상교잡하다. 대장균 157:H7: H7 의 rRNA 가 검사 대상 샘플에 존재하는 경우 형광소 표기 감지 프로브와 폴리아데닌 뉴클레오티드 (poly da) 끝 캡처 프로브가 표적 rRNA 시퀀스와 교차합니다. 그런 다음 폴리디옥사이드 (폴리DT) (고상) 가 있는 프로브를 잡교 용액에 넣는다. PolydA 와 poldT 사이의 염기쌍은 프로브 포획을 용이하게 한다. 과녁 잡교 핵산 분자가 고체 전달체에 결합되고 결합되지 않은 프로브가 씻겨진다. 프로브는 고추 냉이 과산화물 효소-항형광소 점착제에서 배양된다. 결합제는 잡교 검사 탐침에 존재하는 형광소 표시와 결합해 결합되지 않은 시약 세척을 한다. 프로브는 효소 기질-색원체 용액에서 배양되고, 매운 뿌리 과산화물 효소는 효소 기질과 반응하여 색원체를 파란색 화합물로 전환한다. 일단 산을 만나면 반응이 멈추고 색원의 색이 노랗게 변한다. 흡수 값은 450nm 에서 측정되며 흡수 값이 임계값보다 크면 테스트할 샘플에 대장균 157:H7: H7 이 있음을 나타냅니다.

㈧ 중합 효소 연쇄 반응 기술

PCR 기술의 원리는 DNA 프로브의 감도를 높이기 위해 먼저 대상 DNA 서열을 증폭시켜 DNA 의 양을 늘려 충분한 검사를 할 수 있다. 반응이 역학에 기초한다면 정량 분석을 할 수 있다. 1983 Millus 와 세테스는 DNA 를 증폭시키거나 샘플의 특수 뉴클레오티드 조각 수를 늘리는 가장 기본적인 방법인 PCR (폴리효소 체인형 반응) 을 발명했다. PCR 방법은 3 단계 반복 반응을 기반으로합니다. ① 열처리는 이중 가닥 DNA 변성을 단일 가닥 DNA 로 분해한다. (2) 확장 프라이머와 특정 올리고 뉴클레오티드 어닐링; (3) 효소 확장 프라이머와 DNA 페어링 합성 템플릿, 프라이머 어닐링, DNA 단편 변성, 프라이머 하이브리드에 의해 형성된 템플릿은 2 차 반응에 참여할 수 있습니다. 용액 속의 뉴클레오티드는 효소에 의해 보완적인 DNA 조각으로 수렴되어 다시 한 번 단일 체인 DNA 로 분열되어 다음 PCR 복제의 템플릿이 될 수 있다. 따라서 각 주기마다 특정 DNA 가 두 배로 늘어납니다. 전형적인 증폭은 20 ~ 40 개의 순환 후에 654.38+0 만 배의 증폭을 일으킬 수 있다. Taq 중합 효소를 PCR 에 도입하면 반자동적이고 간단하게 반응할 수 있습니다. DNA 를 증폭시키는 PCR 반응은 비교할 수 없는 장점을 가지고 있다.