유전자 동물은 외원 유전자를 염색체 유전자에 안정적으로 통합하고 실험을 통해 안정적으로 표현할 수 있는 동물을 말한다. 65438 부터 0974 까지 Jaenisch 는 세계 최초로 현미주사를 통해 SV40DNA 유전자 변형 쥐를 성공적으로 얻었다. 이후 코스탄티니는 토끼 구슬단백질 유전자를 마우스 수정란에 주입하여 수정란을 쥐로 발전시키고 토끼 구슬 단백질을 표현했다. Palmiter 등은 쥐 성장호르몬 유전자를 쥐의 수정란으로 가져와' 슈퍼' 쥐를 얻었다. 추치는 최초의 유전자 변형 젖소를 얻었다. 지금까지 사람들은 유전자 변형 마우스, 닭, 염소, 돼지, 양, 소, 개구리, 다양한 유전자 변형 물고기를 성공적으로 얻었다.
1. 유전자 변형 동물 기술
원핵 현미경 주사1..1
일명 DNA 현미주사, 즉 현미조작기를 통해 주사기로 수정란에 외원유전자를 직접 주사해 외원유전자를 DNA 에 통합하여 유전자 변형 동물로 발전시키는 것이다. 그것의 창시자는 Jaenisch 와 Mintz 이다. Gordon 과 Palmiter 등은 이런 방법으로 유전자 변형 동물을 연이어 얻었다. 이 방법은 현재 널리 사용되고 있으며, 유전자 변형 동물에 대한 연구는 Palmiter 등의 방법에 기반을 두고 있다. 왕 (1996) 은 현미주사법으로 항페스트 바이러스의 핵산효소 유전자를 토끼 체내에 들여와 유전자 변형 토끼를 얻었다고 보도했다. KrimPenfort 는 체외 배아 배양과 현미주사를 통해 유전자 변형 소를 얻었다.
이 방법은 외원 유전자 도입 통합 효율이 높아 전달체가 직접 목적 유전자를 전송할 필요가 없고, 목적 유전자 길이가 달할 수 있다는 것이 특징이다
1.2 전사 바이러스 벡터 방법
목적 유전자를 레트로 바이러스 벡터로 재조합하여 고농도 바이러스 알갱이를 만들어 배아가 착상 전이나 착상 후 배아에 수동으로 감염되거나 배아를 레트로 바이러스를 방출할 수 있는 단일 층 배양 세포와 직접 부화시켜 감염 목적을 달성한다. 바이러스를 통해 외원 목적 유전자를 숙주 게놈 DNA 에 삽입한다. 이런 방법으로 슬레이터 등은 유전자 변형 닭을 받았고 하스켈은 유전자 변형 소를 얻었다.
DNA 기술을 재구성하여 개조한 레트로바이러스는 마이크로주사법보다 우수합니다. 즉, 리플로우할 필요 없이 통합지점에서 단일 복사본의 전송 유전자를 통합할 수 있습니다. 배아를 고농도 바이러스 용기에 넣거나, 감염된 세포와 함께 배양하거나, 닭 배아판에 미세하게 주사하여 역전사 바이러스 DNA 를 통합하는 배아율이 높다. 단점은 형질 전환 레트로 바이러스를 생산할 필요가 있다는 것입니다. 레트로 바이러스에 삽입 된 유전자에는 일정한 크기 제한이 있습니다. 얻은 유전자 변형 가축은 키메라성이 높아서 대량의 교잡으로 유전자 변형 계통을 세워야 한다. 유전자 변형 표현의 문제는 아직 해결되지 않았다.
1.3 배아 줄기 세포 (ES 세포라고 함) 는 유전자를 배아에 도입한다. 그런 다음 세포를 동물의 배아에 주입한 후, 유전자 변형 배아는 종 키메라에 도달할 때까지 숙주 배아 형성에 참여하여 키메라를 형성할 수 있다. 따라서 유전자 변형 동물을 얻기 위해 외원 유전자를 전달체로 도입할 수 있습니다. 초기 배아의 내세포단이 체외 배양을 통해 만든 다능세포계다.
배아 줄기세포를 배아에 이식하기 전에 체외에서 특정 유전자형을 선택할 수 있다는 장점이 있다. 외원 DNA 가 전염되면 세포에서 배아를 복제한 다음, 통합 외원 DNA 가 포함된 세포를 선별하여 세포 융합을 하면 유전적으로 똑같은 유전자 변형 동물을 많이 얻을 수 있다. 단점은 많은 키메라 유전자 변형 동물의 생식 세포에 유전자 조작이 함유되어 있지 않다는 것이다.
현재 배아세포 매개법은 쥐에서 이미 성숙했지만 대형 동물에서는 응용이 늦다. Evans 등 (198 1) 은 서로 다른 배양체계를 이용하여 마우스 배아의 내세포단에서 분리되어 다능성 줄기세포 복제를 만들었다. Stice 및
Strelchenko 등 (1996) 이 소 배아 줄기세포를 얻었다.