마이크로볼과 항체 사이의 연결에는 흡착 결합과 * * * 가격 결합의 두 가지 형태가 있습니다. 흡착 결합은 마이크로구 표면에서의 항체 비특이적 흡착에 의존하는 반면, * * * 가격 결합은 마이크로구 표면의 반응기와 항체 반응에 의존한다. 흡착 결합은 마이크로볼이 매우 큰 표면적을 가지고 있는 경우에만 가능합니다. 이렇게 하면 표면이 비교적 평평한 마이크로볼의 경우 표면을 처리하여 항체 결합력을 높여 IMMS 표면에 충분한 항체 [75] 를 확보해야 합니다. 표면 처리 후 자성 마이크로구와 단일 복제 항체 은 적절한 완충 용액 에서 배양되어 항체 물리적 흡착 을 통해 자성 마이크로구 에 빠르게 결합된다. 마이크로구 표면에 활성기단이 있다면 느린 화학반응을 통해 자성 마이크로구 표면에 결합된다.

면역 자성 마이크로볼은 주로 세포 분리 등에 쓰인다. 목표물질 특이성과 결합하여 자기반응을 일으킬 수 있기 때문에 면역자성 마이크로볼과 목표물질 (분리될 물질) 을 함유한 복잡한 혼합물을 함께 배양한다. 그런 다음 면역 마이크로볼은 항원-항체 반응을 통해 대상 물질에 선택적으로 결합될 수 있다. 복합물이 자기장 장치를 통과할 때 면역자성 마이크로볼과 결합된 대상 물질은 자기장에 의해 보존되어 다른 복합물과 분리된다.

세포 분리를 위한 면역 자성 마이크로볼은 화학적 성질이 안정적이고 응집이 없는 조건을 갖추고 있다. 세포와 특이성의 결합입니다. 자성 미소 구와 항체 결합은 견고하다. 자성 마이크로볼은 크기가 균일하고, 자기반응이 좋으며, 자성 나노 물질의 함량이 균일하다. 자성 마이크로볼은 크기가 적당하여 세포에 삼키기 쉽지 않다.

IMM 을 세포와 결합하는 두 가지 방법, 즉 직접법과 간접법이 있다. 직접법은 항체 (magnetic microspheres) 가 직접 자성 마이크로볼에 부착되어 과녁 세포와 결합되는 것을 말한다. 간접법은 세포와 특이항체 혼합 배양을 통해 특이항체 () 를 세포 표면에 결합한 다음 항쥐 IgG (이항) 로 미리 처리한 자성 마이크로볼을 넣는 것을 말한다. 자성 마이크로볼과 과녁 세포의 간접 결합. 직접법은 세탁과 배양 단계를 줄일 수 있지만 IgM 단일 복제 항체 사용은 거의 없습니다. 직접법에 비해 간접법은 사용 범위가 넓을 뿐만 아니라 단일 복제 항체 세트도 사용할 수 있어 세포 제거 효과가 더 좋다. 그러나 여러 차례 세탁 절차를 거친 후 특이성이 떨어진다.

단핵세포를 겨냥한 단일 복제 항체 발전으로 특정 표면 표시가 있는 세포를 분리할 수 있게 되었다. 일반적으로 스트리밍 세포술 (PACS), 표면에 이항이 붙어 있는 동종 적혈구 화환, 폴리스티렌 조직 배양판 수동 흡착 항체 채취 기술이다. 이 기술들은 모두 각자의 결점이 있다. FACS 는 가격이 비싸고 기술이 복잡하며 선택한 세포의 용량, 활성 및 무균성에 시달리는 경우가 많습니다. 적혈구 화환 기술은 대량의 세포를 처리할 수 없다. 게다가, 아직 성숙하지 않은 간단한 방법은 항체 결합을 적혈구 막에 결합하는 것이다. 변환 기술에도 많은 제한이 있습니다. 확대하기 어렵고, 단계가 번거롭고, 수량화할 수 없다. 과녁 세포는 보통 배양판 바닥에 흡착된 다른 세포에 흡착된 비 특이항체 세포와 혼합된다. 상대적으로 면역자성 마이크로볼은 조작이 간단하고, 분리가 빠르고, 세포 순도가 높다는 장점이 있으며, 특히 조작이 간단하고 시간을 절약하는 면에서 다른 분리 방법과 비교할 수 없다.

자기 구슬은 세포 분류의 관건이다. Miltenyi Biotec 의 특허 MACS 구슬을 예로 들어 보겠습니다. 자기 구슬의 지름은 50 나노미터로 바이러스 입자의 크기에 해당하며 진핵 세포의 백만 분의 1 에 불과하다. 주사 전자 현미경은 세포 표면의 자기 구슬만 볼 수 있다. 이런 자기구슬은 안정된 콜로이드 용액을 형성하여 자기장에서 침전도 수렴도 하지 않는다. 자성 구슬은 산화철과 다당으로 이루어져 있으며, 최대 세포 표면의 3 분의 1 의 특징 항원과 결합된다. 그리고 몸이 작기 때문에 세포에 의해 분해될 수 있고, 세포의 기능과 활력을 활성화하거나 영향을 주지 않으며, 세포의 생리 기능은 변하지 않는다. 따라서 세포가 분리되면 자기 구슬을 제거할 필요가 없으며, 양성으로 분리된 세포 (즉 자기 표시 세포) 는 즉시 분석과 후속 실험에 사용될 수 있다.

MACS 기술은 매우 순수한 세포군을 분리할 수 있어 회수율과 생존율이 매우 좋다. 세포 빈도와 항원 표시물 표현 수준에 따라 분리된 세포의 순도는 95 ~ 99.9%, 회수율 & gt90% 에 이른다.

1 단계 양성 MACS 기술에 의해 선택된 세포의 수는 109 에 달할 수 있다. 초기 단위 볼륨이 105 인지 10 1 1 인지에 관계없이 동일한 간단한 절차를 사용합니다. 자성 표시 세포는 약 15 분 정도 걸리며, 분리 기둥으로 자성 세포를 분리하는 데 몇 분 밖에 걸리지 않습니다. 서로 다른 사양의 열을 사용하여 서로 다른 수의 셀을 자유롭게 정렬할 수 있습니다.

자기적으로 표시된 세포는 항체 결합 형광 염료로 동시에 염색할 수 있으며 세포 분류의 품질 관리 및 분석에 사용할 수 있습니다. MAC 의 마이크로자기주는 아현미해서 표시된 세포의 산란광에 영향을 주지 않기 때문이다. MACS 로 분류된 세포는 스트리밍 세포계로 직접 측정하거나 형광 현미경, PCR 또는 FISH 와 호환됩니다.

MACS 기술은 10-8 까지 낮은 희귀 세포의 양성 분류에 사용할 수 있습니다. 빈도가 낮은 세포의 경우 배제법과 양수 선택법을 결합하여 분리할 수 있다. 현재는 세포의 세포질 단백질이나 활성 세포의 분비 단백질에 따라 세포 분리도 할 수 있다.