생쥐 체세포에 대한 염화리튬의 유전독성에 관한 실험적 연구
리튬염은 배터리, 화학, 세라믹 제조, 야금, 국가 등 첨단 산업에서 널리 사용됩니다. 리튬 근로자의 수가 계속해서 증가하고 있으며 그에 따른 직업적 위험 문제도 날로 증가하고 있습니다. 리튬염은 항조증 치료 효과로 인해 임상 환경에서 널리 사용됩니다[1]. 세계는 매년 최대 25,000톤의 리튬을 사용합니다. WHO 통계에 따르면 전 세계적으로 최소 5억 명이 다양한 정신질환을 앓고 있으며 이는 세계 인구의 10%에 해당한다. 리튬염의 치료용량과 독성용량의 안전역이 작고, 다양한 독성효과가 자주 발생하며, 정신질환에 대한 치료과정이 길기 때문에 장기간 만성노출에 따른 위험성에 대한 연구와 안전성에 대한 과학적 근거 제시가 필요하다. 사용. 현재 일론잔에서 리튬이 생쥐의 골수 소핵 비율에 미치는 영향을 제외하고는 생쥐에서 리튬염의 유전독성에 대한 다른 보고는 없습니다. 따라서 본 연구에서는 염화리튬의 생식발달 및 생식발달을 조사하고자 합니다. 우리 연구실에서는 면역 독성 및 최기형성 테스트를 기반으로 Kunming 마우스의 여러 조직에서 체세포에 대한 염화 리튬의 유전 독성이 관찰되었습니다.
1 재료 및 방법
1.1 재료
1.1.1 실험동물 신장의료실험동물센터에서 건강한 쿤밍쥐 18~25g, 25~25g 제공 30g.
1.1.2 실험의 주요 시약 염화리튬: LiCl. H2O, 분자량 60.41, 분석 등급, 상하이 시약 2공장에서 제공. 시클로포스파미드(CP): Shanghai No.12 Pharmaceutical Factory에서 제공. 콜히친: C22H25O6N, 분자량 399.43, 곤명제약공장에서 생산.
1.2 방법 및 관찰 지표
1.2.1 마우스 골수 세포의 염색체 이상 테스트를 위해 성적으로 성숙한 건강한 쿤밍 마우스 40마리(체중 18~25g)를 무작위로 선택하여 절반씩 채취했습니다. 남성과 절반의 여성을 5개 그룹, 3개 노출 그룹, 음성 및 양성 대조군으로 나누었습니다. 용량 선택은 본 연구실에서 얻은 LD50을 기준으로 고용량군은 1/8 LD50, 중용량군은 1/24 고용량군, 저용량군은 1/80 LD50 입니다. 즉, 각 그룹의 복용량은 225, 75, 22.5 mg/kg 염화리튬 용액이고, 음성 대조군에는 증류수를 투여하였다. 독극물은 1일 1회, 5일간 지속적으로 투여하였으며, 양성대조군에는 도살 1일 전에 CP40 mg/kg을 복강내 주사하였다. 각 군의 동물은 도살 2~3시간 전에 주사하였고, 콜히친 4mg/kg을 복강내 주사하였으며, 마지막 노출 6시간 후에 동물을 희생시켜 양측 대퇴 골수를 채취하여 통상적인 절차에 따라 준비하였다. 골수 세포의 염색체 이상 비율.
1.2.2 마우스 골수 세포의 소핵 시험 체중 18~25g의 건강한 성적으로 성숙한 Kunming 마우스 50마리를 선택하며, 절반은 수컷이고, 각 그룹의 투여량은 위와 같습니다. 마지막 노출 24시간 후 마우스를 희생시켰고, 양쪽 대퇴골의 골수를 채취하여 전통적인 방법에 따라 도말하여 골수 내 다염성 적혈구의 소핵 비율을 관찰했습니다.
1.2.3 마우스 태아 간세포의 소핵 시험을 위해 25~30g의 건강한 성적으로 성숙한 Kunming 마우스를 선택하고, 수컷과 암컷을 2:1의 비율로 함께 가두어 두었다. 질전이 발견된 날을 임신 0일로 기록하였고, 임신한 쥐 50마리를 무작위로 5그룹으로 나누었으며, 그룹화 및 노출량은 위와 동일하였다. 임신 14일째에 약물을 위관 영양법으로 1회 투여했으며, 노출 후 12~18시간 후에 마우스를 죽였습니다. 각 새끼에서 최소 2개의 태아 간을 채취하여 문헌 방법에 따라 준비했습니다. 태아 간에서는 소핵 비율이 관찰되었습니다.
1.2.4 통계 방법: PEMS 소프트웨어 패키지를 사용하여 q 테스트와 순위 합계 테스트의 분산 분석과 쌍별 비교를 사용하여 데이터의 통계 분석을 수행합니다.
토론
3.1 염화리튬이 마우스 골수세포의 염색체 이상율에 미치는 영향
리튬이 뼈의 염색체 이상율에 미치는 영향에 대하여 학자들은 1975년 Bille 등이 리튬염으로 치료받은 환자를 연구한 후 골수 세포의 염색체에서 어떠한 염색체 이상도 발견하지 못했다고 보고했습니다[3]. Sobti는 쥐의 골수 세포에서 염화리튬, 탄산리튬, 아세트산리튬의 3가지 종류의 리튬염에 의해 발생하는 염색체 이상을 연구한 결과, 이 3가지 종류의 리튬염이 쥐의 염색체에 손상을 미치는 것으로 나타났습니다. 연구 결과에 따르면 리튬은 선택적으로 DNA에 결합할 수 있으며 Mg2+와 경쟁하여 DNA 합성 및 복구를 약화시켜 염색체 이상을 유발할 수도 있습니다. ]. 테스트 결과 균열, 균열 및 링이 가장 일반적인 변형 유형인 것으로 나타났습니다.
그 중 깨진 고리는 염색체 이상으로, 이는 '불안정한' 이상으로 세포 사멸로 이어지는 경우가 많다. 균열이 염색분체 이상으로 판단될 경우, 이로 인한 손상이 유전적 손상으로 이어지기 쉽다. 이는 민감한 유전 독성 매개변수로 잘못 복구될 수 있습니다. 이 실험 결과는 225.0mg/kg 용량의 염화리튬이 마우스 골수 세포에 유전독성 영향을 미치는 것으로 나타났습니다.
3.2 염화리튬이 마우스 골수 세포의 소핵 비율에 미치는 영향
포유류 골수 세포의 소핵 비율을 검출하는 것은 일반적으로 사용되는 돌연변이 유발 단기 검출 방법 중 하나입니다. 유도된 염색체 손상을 결정합니다. 소핵은 손상으로 인해 유사분열의 후기 단계 동안 세포질에 남아 있는 동원체가 손실된 염색체 조각 또는 염색체 조각입니다. 이 실험 결과는 225.0 mg/kg 용량의 염화리튬이 마우스 골수 세포에서 염색체 파손 및 손상을 일으킬 수 있음을 보여줍니다.
3.3 염화리튬이 생쥐 태아 간의 소핵 비율에 미치는 영향
실험에 따르면 많은 화학물질이 모체 골수 세포보다 생쥐 태아 간 세포에 염색체 손상을 훨씬 더 많이 유발하는 것으로 나타났습니다. 염색체. 따라서 성체 동물을 대상으로 한 생체 내 실험만으로는 배아기 동안 유전적 독성 물질에 노출되어 태아에 미치는 피해를 신뢰성 있게 예측할 수 없으며, 배아 발생 과정에서 동물의 일생 동안 새로운 세포를 공급하는 줄기세포가 형성됩니다. 따라서 배아기의 염색체 손상은 출생 후 자손의 종양 및 기타 질병에 대한 감수성을 증가시킬 수 있으며, 배아기의 돌연변이 유발 물질의 영향도 신생아 기형의 비율을 증가시킬 수 있습니다. 따라서 화학물질의 잠재적인 유전적 위해성을 평가할 때에는 태아에 미치는 영향에 충분한 주의를 기울여야 한다. 포유동물의 태반 대사는 임신 중에 활발해지기 때문에 돌연변이 유발 물질에 대한 산모의 민감도가 증가합니다. 미성숙 배아 세포는 활발하게 분열하며 돌연변이 유발 물질에 매우 민감합니다. 일부 돌연변이원과 발암물질은 간에서 대사되고 활성화되어 간에서 돌연변이원의 농도가 증가합니다. 따라서 특정 독극물의 작용으로 태아 세포의 염색체가 파괴되어 소핵이 증가합니다. 따라서 배아세포 소핵 검사는 골수 소핵 검사에 둔감한 전구돌연변이원과 전발암원을 검출하고, 태반장벽을 통과하여 자손에게 전달될 수 있고 체내에 축적되기 쉬운 화학적 돌연변이원을 선별하는 데 사용할 수 있습니다. 태아. 태아 쥐의 태아 간에서 다염성 적혈구의 소핵 비율을 측정하는 동안 우리는 모체 골수 세포의 소핵 비율도 관찰했습니다. 실험 결과는 염화 리튬이 태아 쥐에 명백한 유전 독성 영향을 미치는 것으로 나타났습니다. 동시에, 동일한 용량에서 골수 세포의 소핵 비율과 태아 간 세포의 소핵 비율을 비교한 결과, 모체 골수 세포는 태아 마우스 간 다염성 적혈구만큼 염색체 염색체 이상물질에 민감하지 않은 것으로 나타났습니다.
위의 실험 결과를 토대로 염화리튬을 경구 투여하면 쿤밍 쥐의 체세포에 유전 독성 효과가 있고, 태아 쥐의 체세포에 유전 독성 효과가 더 뚜렷하다는 결론을 내릴 수 있다. 마우스 생식 세포에 대한 염화리튬의 유전독성 효과를 더 연구하는 것이 필요합니다.