신체 활동, 근육 수축, 신진대사, 종양 발생 등. 포유류 세포 중 3 분의 1 이 넘는 단백질은 인산화될 수 있고, 단백질의 가역인산화는 단백질의 연구를 더욱 복잡하게 만드는 것으로 집계됐다. 진핵 세포 단백질의 주요 인산화 아미노산은
세린, 트레오닌, 티로신의 비율은 약1800: 200:1121이다. 대부분의 인산화 단백질에는 인산화 부위가 여러 개 있는데, 그들의 인산화 부위는 가변적이다. 따라서 단백질에는 여러 가지 인산화 형태가 있을 수 있다. 인산화 단백질의 프로테오믹스 분석은 이미 큰 진전을 이루었지만 인산화 단백질과 피부 조각의 농축, 역인산화 부위의 인식, 인산화 부위의 정량 등 해결해야 할 어려움이 여전히 많다. 1 인산화 단백질 식별
세포 중 인산화 단백질의 함량은 매우 적다. 스펙트럼 분석에서 인산화된 복단 신호는 종종 비인산화된 피단 신호에 의해 억제된다. 따라서 인산화 단백질과 피부 조각의 농축은 인산화 부위의 검출을 높이는 데 매우 중요한 역할을 한다.
1 의 농축. 1 인산화 단백질
과거에는 인산화 단백질 농축과 관련된 방법은 주로 특정 단백질에 대한 항체 면역 침전을 사용했다. 그러나 법은 먼저
달걀 흰자위는 대규모 연구에 적합하지 않다는 것을 알고 있다. 최근 인산화단을 겨냥한 항체 () 가 나왔지만, 그것들은 인에만 내성이 있다.
산화티로신의 항체 효과가 더 좋다 [4 1. 그러나 인산화 세린 (serine) 과 트레오닌 (suline) 에 대한 항체 특이성은 강하지 않다. 최근 상업화되었습니다
인산화 단백질 순화 농축 테스트 키트 는 이미 효모에서 성공적으로 적용되었지만, 다른 조직에서의 응용은 아직 보도되지 않았다.
1.2 인산화 단백질 접착제 염색
달걀 흰자위 혼합물에서 인산화 단백질을 검출하는 고전적인 방법이 먼저다
전기 영동에 의해 단백질을 분리한 다음, 방사자현상 또는 인을 사용한다
면역 각인으로 산성화된 단백질을 검출하다. 최근 프로 Q Diaround
인산화 단백질 접착제 염색은 중요한 기술 돌파구이다.
。 Break b]. 이런 특수한 형광 염료는 접착제에서 직접 검출할 수 있다.
인산화 세린, 소당산, 티로신의 경우 인산화되지 않는 단백질
특별한 항체 또는 동위 원소 마커가 필요합니다. 이런 염색은 적합하다
SDS- 폴리아크릴 젤과 2 차원 폴리아크릴 젤입니다.
이 염색은 후속 질량 분석법과 완전히 호환됩니다. SYPRO
루비 염색은 총 단백질의 염색이다. 모든 수영 벨트를 통과하거나
점당 Pro-Q 다이아 염색과 SYPRO 루비 염색입니다.
인산화 단백질이 총단백질의 비율을 알 수 있다.
두 가지 단백질 염색의 결합은 고풍도 단백질의 인 함량을 낮출 수 있다.
산성화 상태는 저풍도 단백질의 과도한 인산화 상태와는 다르다.
2 개의 인산화 된 피부 단편의 농축
인산화 부위의 검사는 종종 단백질 수준에서 직접 수행되는 것이 아니다.
테스트, 하지만 피부 수준에서. 하지만 L 때문에.
현상의 존재는 분석하기 전에 인산화 피부 세그먼트를 먼저 진행해야 한다.
충실하다.
2. 1 고정 금속 친 화성 크로마토 그래피
현재 가장 널리 사용되는 방법은 인산화된 복부 조각을 분리하고 농축하는 것이다.
고정 금속 친화층 분석 (fixed metal affinity)
색상 스펙트럼, IMAC). 이런 방법에서는 결합이 킬레이트에서 이루어진다.
금속 이온 선택 (예: Fe3). , 가스. , 힌트 등. ) 기초 슬래브에 있습니다.
높은 pH 값에서 인산화면의 인산기단과 선택적으로 결합한다.
, 또는 인산염 완충액. 세티
탈염 후 용액은 직접 스펙트럼 분석에 사용할 수 있다.
IMAC 는 보통 인산화된 티로신, 세린, 트립토판이 풍부하다.
아미노산 잔기. 하지만 이 방법의 한계는 곰을 잃는 것이다.
IMAC 기둥을 바인딩하지 않는 저풍도 인산화 피부를 제거한다.
단락; 폴리인산화 부위를 가진 피부는 친화력이 강해 매우 매력적이다
씻기 어렵다; 일부 산성 그룹 (예: 아스파르트 산 및 글루타민)
산), 히스티딘과 같은 전자 공급체도 기둥에 결합된다.
비인산화 피부 오염. 따라서 인산은 IMAC 방법으로 농축된다.
껍질을 벗기는 효과는 선택한 금속 이온에 크게 좌우된다.
기둥을 채우는 재료와 용출 절차. 최근에, 피카로는
[C 1] 피부의 산성 잔류물을 식힌 후 IMAC 부를 축적합니다.
처리 후 특이성이 크게 높아져 광범위한 인산화가 예상된다.
이 분석은 광범위한 전망을 가지고 있다.
2.2 인산화 복절의 화학적 변형
최근 O da 등 [1- 1] 은 피부나 단백질 혼합물을 알칼리성 유황에 넣는다.
디 에탄올 용액에서 P2 는 세린 또는 세린의 인산화를 제거하는 데 사용됩니다
인산기단 H3P0 이 트레오닌에서 제거되어 형성된 이중 결합은 황의 영향을 받기 쉽다.
디 에탄올의 대체, 류큐에 의한 인산염의 대체. 바이오틴과 류큐
항바이오틴 단백질이 고정되어 있는 연결된, 표시된 피부나 단백질.
색상 스펙트럼은 바이오틴과 친화소 사이의 높은 친화력을 통해 실현된다.
인산화 피부나 단백질 농축의 목적을 달성하다. 이 방법의 주요
단점은 티로신 인산화 단백질과 피부를 풍부하게 할 수 없다는 것이다.
주 등 I) 또 다른 방법으로 이산화탄소를 이용하여 인산화를 손질한다.
이민 농축 반응: 인산 부분에 반철 붕산을 넣어 손질한다.
가죽과 요오드아미드수지는 원자가 결합으로 산세 방출을 한다.
올려놓다. 이 방법은 인산화 티로신과 인산화 티로신을 풍부하게 하는 데 사용할 수 있다.
인산화 세린 및 인산화 트레오닌을 설치하지만 많은 단계가 필요합니다.
화학반응과 기둥순화 과정.