첫째, 영양 결핍 균주를 스크리닝하는 일반적인 단계와 방법

① 자외선, 화학 유인제 등 물리적 방법은 대량의 영양 결함형 균주를 유도한다. 15W 또는 20W 자외선 램프를 사용하여 15cm ~ 30cm 에서 10s ~ 20min 을 비춥니다. 시험균을 비추기 전에 램프는 빛을 안정시키기 위해 20min 을 예열해야 한다. 자력을 통해 세균 현액을 저어서 모든 단세포나 단일 포자를 고르게 비춰야 한다. 어둠이나 적외선 하의 조작에 특별한주의를 기울여야 한다. 접종 후 기구는 가시광선 회복을 방지하기 위해 검은 천으로 단단히 싸여 있다.

② 야생 배제

A) 항생제법 일부 항생제는 성장하고 번식하는 미생물을 죽일 수 있지만 정지된 미생물에는 살멸 효과가 없다. 페니실린은 세균 세포벽 폴리당의 생합성을 억제하고, 곰팡이를 만들면 곰팡이 세포막을 파괴하고 각각 세균과 곰팡이를 죽일 수 있다.

B) 균사체 필터는 방선균이나 곰팡이와 같은 실크 미생물에 적용된다. 기본 배양기에서 야생형 포자는 균사체로 싹트고 영양결함형 포자는 자라지 않는다. 유인된 포자를 액체 기초 배양기에 접종하고 10h ~ 12h 를 진동시켜 원영양형을 싹트게 한 다음 (육안으로 균사를 볼 수 있는 한) 여과지, 면 또는 유리로 깔때기를 걸러내면 균사가 여과되어 싹이 나지 않게 한다

③ 결함 유형을 검출하는 일반적인 방법.

A) 하나씩 측정하는 방법 (점종법) 은 완전 배양기에 도포분리 유인처리를 하고 야생형 균액을 제거한 뒤 배양한 각 균을 기본 배양기와 또 다른 완전 배양기에 각각 붙이는 것이다. 기본 배양기에서 자랄 수는 없지만, 전체 배양기의 해당 위치에서 성장할 수 있는 균락은 그것이 영양 결함형이라는 것을 보여준다.

B) 샌드위치 배양법에서 유인균액을 희석해 기초배양기와 섞은 후 배양접시에 붓는다. 굳은 후, 박층 기본 배양기를 첨가하여 세균을 함유하지 않는다. 배양 후, 배양 접시 바닥에 자라는 식민지를 표시한다. 그런 다음 전체 배양기를 한 층 더 넣으면 배양 후 새로 나타난 균락은 대부분 영양결함형이다 (그림 3-3 1). 이 방법은 겸성 혐기성 박테리아에 적합합니다.

C) 복사법은 벨벳을 평평한 접시보다 지름이 작은 원통형 탁자에 싸서 고정시켜 복사접종 도구로 멸균준비한다. 유인하여 제거한 야생형 균액을 전체 배양기 표면에 도포하여 배양하다. 균락이 자랄 때, 복사접종 도구로 이 판에 가볍게 눌렀다가 또 다른 기본 배양기 판에 눌렀다. 기본 배양기에는 길지 않지만 배양 후 전체 배양기의 해당 부분에서 자라는 균락은 영양결함형이다.

(4) 영양결함형 감정-성장보법: 탐지된 영양결함형 균주를 전체 배양기에 접종하고, 성장한 균체나 포자를 깨끗이 씻고, 원심세탁하여 농도가107/ML ~108 로 만든다 0. 1ml 이 현액을 기본 배양기와 섞어서 페트리 접시에 붓고 농축하여 약간 건조시킨 다음 다양한 지역에 각종 영양소가 묻은 원형 여과지를 넣어 배양하고 성장반응을 관찰한다.

영양 결함형을 선별하는 과정에서 표현형 지연에 주의해야 한다. 돌연변이는 일반적으로 단일 가닥 DNA 에만 작용하기 때문에 돌연변이는 대표형에 반영되지 않으며, DNA 복제와 세포 분열이 있어야 표형이 돌연변이를 일으킬 수 있다. 이를 표형 지연이라고 한다.

2. 항생제에 민감한 세균 영양결함형 돌연변이의 농축과 분리방법은 원양형 배양기 (즉 영양결함형 필수 영양소가 부족한 배양기) 에 항생제를 첨가하여 성장하고 있는 야생형 세포를 죽일 수 있지만 성장할 수 없는 돌연변이는 면할 수 있다.