전체 과정은 조직, 체액 또는 세포에서 단백질을 추출하고 단백질 혼합 용액 (연구 목적에 따라 단백질을 먼저 분리하거나 분리하지 않을 수 있음) 을 얻은 다음 복원성 알킬화 (
1, 샘플 수집 및 저장
조직 샘플
1) 인체 절제 조직의 경우 가능하면 PBS (인산염 완충염수 용액, 용제로 시약 용해 역할을 함) 를 이용해 직접 피를 제거하는 것이 좋다. 혈액이 제거되지 않으면-80 C 의 액체 질소에 보관해 드라이아이스로 운반할 수 있다.
(2) 쥐, 쥐, 토끼 등 조직 샘플의 경우, 특히 간, 위, 심장 등 조직의 경우 직접 피를 제거하여 가장 깨끗한 피를 얻을 수 있도록 관류를 사용하는 것이 좋습니다. 두 번째 방안은 후절할 때 피를 제거하는 것이다.
세포 샘플
일반 실험의 경우 5* 1E6~ 1E7 세포보다 큰 샘플량을 받는 것이 좋습니다 (일부 실험은 더 적은 샘플량을 요구하며 나중에 자세히 설명합니다). 세포를 채취한 후 먼저 PBS 로 세포 표면을 씻는다. 배양기 대부분이 혈청을 함유하고 있기 때문에 이 부분의 혈청을 먼저 씻어야 한다 ~
분비단백질 연구라면 먼저 PBS 로 샘플을 몇 번 씻은 다음 조건 배양기 (무혈청 배양기) 에서 배양해야 한다. 세포 상황에 따르면 약 12 시간 후에 우리는 원심분리기를 통해 분비단백질을 추출하여 세포 조각을 제거하고 청액을 채취할 수 있다.
혈청 샘플
1) 혈장 샘플: 일반적으로 사용되는 EDTA 항응고관을 통해 채집할 수 있으며, 채집된 혈장은 공중에 떠 있고, 원심분리기는 혈구를 제거한다.
2) 혈청 샘플: 현재 대부분의 연구는 혈청 샘플을 겨냥한 것으로, 성분이 더 간단하고, 렉틴과 대량의 혈구를 함유하지 않아 표적이 더 강하다. 혈청 샘플을 채취할 때 혈청을 시험관에 직접 흡입하여 실온에서 굳히게 한다. 상청액의 노란색 부분은 혈청 샘플이다.
2, 연마 또는 초음파 분쇄 샘플, 인공조작에 도입된 장식을 줄이기 위해 보통 대량의 얼음을 준비하고 얼음 위에서 조작해야 한다. 또한 단백질효소 억제제를 첨가해 조작 중 단백질이 샘플의 단백질 효소에 의해 분해되는 것을 방지해야 한다.
단백질을 완전히 용접하십시오. 단백질이 완전히 용해되지 않으면 추출할 수 있는 단백질이 매우 적어서 연구 목적이 이루어지지 않는다.
4. 완전 해회전 단백질, 보통 단백질은 구형안정 상태에 있고, 해회전 단백질은 구형 단백질의 이황결합을 열어 사슬 구조를 형성하여 다음 단계의 효소 소화를 진행한다.
5. 단백질의 효소 가수 분해는 보통 단백질은 각종 효소에 의해 가수 분해된다.
6, 불순물을 제거, 질량 스펙트럼은 매우 민감한 악기, 그것은 폴리펩티드의 질량-전하 비율을 검출한다는 것을 알아야합니다. 모든 소금과 모든 이온화된 불순물은 플루토늄 세그먼트의 검사를 방해한다. 따라서 우리는 단백질 샘플을 질량 스펙트럼에 들어가기 전에 매우 깨끗하게 할 것을 요구할 것이다. 단백질 수준과 펩타이드 수준에서 불순물을 제거하다.
더 자세한 건 다음에 얘기하자 ~