트롬빈 시간 측정과 프로트롬빈 시간 측정의 차이점은 무엇인가요?

프로트롬빈 시간(PT) 측정과 콜린에스테라제(ChE) 활성 검출의 임상적 의의는 무엇인가요?

프로트롬빈은 간에서 합성되는 단백질이다. 프로트롬빈 검사는 간의 응고 기능을 반영하는 혈액 응고를 이해하기 위한 검사입니다. 프로트롬빈 시간(PT)은 응고 인자 I, V, VII 및 X와 관련이 있으며 이러한 인자는 간에서도 합성됩니다. 프로트롬빈 시간의 정상 값은 11~15초입니다(Quiet의 방법). 간질환이 발생하면 간기능이 저하되고, 합성장애로 인해 위에서 언급한 응고인자의 함량이 감소되어 프로트롬빈시간이 연장되어 응고장애를 일으킬 수 있다. 예를 들어, 중증 간염의 경우 프로트롬빈 시간이 상당히 연장되어 환자가 출혈을 일으키기 쉽고 예후가 좋지 않습니다. 만성 활동성 간염 및 간경변의 경우 명백한 간세포 손상 없이 간외 폐쇄 시 프로트롬빈 시간이 약간 연장될 수 있습니다. , 프로트롬빈 시간은 정상일 수 있습니다. 장기간의 간외 폐쇄, 담즙 정체 및 비타민 K 흡수에 영향을 미치는 경우에도 프로트롬빈 시간이 연장될 수 있습니다. 환자에게 비타민 K를 주사하면 프로트롬빈 시간이 정상으로 돌아올 수 있습니다.

또한 프로트롬빈의 반감기가 짧기 때문에 급성 중증 간염이 발생한 후 짧은 시간 내에 프로트롬빈 시간이 변화하므로 프로트롬빈 시간을 측정하는 것이 진단에 중요하며, 중증 간염의 상태 및 진단 예후 결정은 중요한 임상적 의미를 갖습니다.

"유사" 또는 "비특이적" 콜린에스테라아제라고도 알려진 혈청 콜린에스테라아제는 간에서 합성되는 덜 특이적인 효소로, 아세틸콜린에 작용할 수 있으며 다른 콜린 에스테르에 작용하는 효소도 있습니다. 정상값은 0.80~1.00 또는 40단위 이상입니다.

혈청 콜린에스테라제의 반감기가 짧기 때문에 간내 손상에 대한 매우 민감한 검사이며 간 효소 합성 장애를 반영합니다. 활동 감소 정도는 종종 간 질환의 중증도와 일치합니다. 예를 들어, 중증 간염 환자의 콜린에스테라제 활성 수치는 일반적으로 정상보다 낮으며, 감소 정도는 약 80%의 환자에서 질병의 중증도와 밀접한 관련이 있으며, 이들의 혈청 콜린에스테라제 활성은 60%까지 떨어질 수 있습니다. 중증 환자의 경우 10% 이하로 떨어지더라도 대부분의 환자는 곧 사망합니다. 따라서 혈청 콜린에스테라제 활성 측정은 중증 간염의 진단과 상태 및 예후 판정에 도움이 됩니다. 또한 중증 만성 간염 및 진행성 간경변증 환자의 경우 혈청 콜린에스테라아제도 다양한 정도로 감소합니다.

혈전증 및 지혈 검사실 검사의 임상적 중요성은 나날이 증가하고 있으며, 검사 내용도 지속적으로 확대되고 있으며, 방법 업데이트, 시약 상용화, 자동화 등 업무량도 지속적으로 증가하고 있습니다. 기존의 수동작업과 자체 시약을 준비하는 방식으로 작업 방식이 바뀌었고 작업 효율이 낮습니다. 동시에 방법 표준화와 품질 관리도 특히 중요합니다. 그러나 혈전증 및 지혈 검사의 특이성으로 인해...

(프로트롬빈 시간(PT), 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(APTT) 및 피브리노겐(FIB)(프로트롬빈 시간(PT) 결정을 포함한 세 가지 실험) ), 활성화된 부분 응고 활성 등) 효소 시간(APTT) 및 피브리노겐 결정을 포함한 세 가지 실험의 표준화 및 중요성을 간략하게 설명합니다.

키워드: 프로트롬빈 시간, 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간, 피브리노겐 표준화

혈전증 및 지혈 실험의 특수성으로 인해 지금까지는 프로트롬빈 시간(프로트롬빈 시간(PT)을 포함한 세 가지 실험 ), 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(APTT) 및 피브리노겐(Fg), 표준화된 시약(예: PT), 표준(예: Fg), 품질 관리 제품 및 통합 보고 양식 등 혈소판 기능과 같은 기타 테스트가 있습니다. 항응고 인자 및 섬유소 용해 성분은 아직 성숙하고 표준화된 프로토콜이 부족합니다.

이 글은 국제혈액표준화위원회(ICSH), 국제혈전증 및 지혈위원회(ICTH), 국가임상생화학표준위원회(NCCLS) 문제에 대한 소개.

1. 표준화 및 정도 관리의 중요성

혈전증 및 지혈 검출 방법의 소위 표준화 및 정도 관리는 통계적 원리를 사용하고 표준화된 물리적 방법을 사용하는 것을 의미합니다. , 화학적, 생물학적 방법을 사용하여 혈전증 및 지혈 실험의 기술, 작업, 도구, 시약 및 표본의 품질 수준을 합리적으로 관리, 테스트 및 평가하고 표준화 및 품질 관리를 사용하여 오류를 제거합니다. 실험의 정확성과 정확성을 향상시킵니다. 표준화 및 품질 관리의 중요성은 다음과 같습니다.

1. 임상 진단 및 치료를 위한 신뢰할 수 있는 기반 제공: 실험 결과의 신뢰성은 질병의 임상 진단 및 치료를 위한 중요한 기반이자 조건입니다. 실험 결과가 위양성인 경우 오진 및 오진이 발생하고, 위음성인 경우 진단 누락 및 치료 실패가 발생하며, 실험 결과가 너무 높거나 낮으면 환자의 진단, 감별진단에 영향을 미칩니다. , 그리고 상태와 치료 효과에 대한 의사의 판단입니다.

2. 혈전증 및 지혈에 관한 기초 연구의 효율성과 가치를 향상시킵니다. 혈전증 및 지혈에 관한 기초 연구의 형태는 다양한 실험을 수행하는 것입니다. 실험의 신뢰성이 좋으면 혈전증과 지혈의 객관적인 법칙을 밝힐 수 있으며, 심지어 중요한 이론적 돌파구 및/또는 사회적, 경제적 이익을 가져올 수도 있습니다. 실험의 신뢰성이 낮거나 오류가 있으면 환상이나 잘못된 결과를 낳을 수 있습니다. 이론.

3. 인구 집단 건강 조사 및 혈액학적 지표의 정상 범위 설정에 도움이 됩니다. 특정 집단의 건강 수준을 이해하고 혈액학적 기준 값의 범위를 설정하기 위해 광범위한 의미를 갖기 위해서는 대규모 인구 조사가 필요하며, 건강 조사는 실험 결과의 신뢰성이 보장되어야 하며, 그렇지 않으면 부정확하거나 잘못된 결과가 나올 수 있으므로 품질 관리도 인구 집단 의학에 있어서 큰 의미를 갖습니다.

간단히 말하면 혈전 지혈 연구실의 품질 관리는 해당 국가, 지역, 단위의 혈전 지혈 의료 및 연구 수준을 어느 정도 반영한다. 그러므로 더욱 주의를 기울여야 한다.

2. 프로트롬빈 시간(PT)의 표준화

퀵이 1935년에 프로트롬빈 시간(PT) 측정 방법을 창안한 이후 여전히 외부 소스를 검출하는 최초의 방법으로 중요합니다. 다양한 인자 및 응고계 관련 억제제에 대한 선별검사로서, PT는 현재 경구용 항응고제 치료의 주요 방법이기도 합니다. 그러나 PT 측정은 많은 요인의 영향을 받으며, PT 테스트의 정밀도, 정확성 및 신뢰성을 향상시키기 위해서는 표준화되고 품질 관리가 필요합니다.

(1) 프로트롬빈 시간(PT)의 표준화 문제

1. 조직 트롬보플라스틴의 표준화: 사용되는 국제 참조 제제 IRP에는 다음 종이 포함됩니다.

(1) 단일조직 트롬보플라스틴 국제표준품 : 조직추출물의 생리식염수 현탁제제이다. 영국의 WHO에서 사용하는 통일표준 "영국 비교 트롬보플라스틴(BCT)"을 기반으로 WHO의 1차 트롬보플라스틴 참조 제제(1차 참조 제제)가 제조되는데, 예를 들어 인간 뇌 조직 트롬보플라스틴, no. 동시에 BCT67/40을 기반으로 2차 참조 준비(secondary reference prepare)를 표준화했습니다. 예를 들어, 소의 뇌 조직 트롬보플라스틴은 68/434로 번호가 매겨져 있고, 토끼의 뇌는 70/178로 번호가 매겨져 있습니다. 나중에 WHO는 BCT/253과 같은 인간 뇌 또는 태반 제제와 RBT/79와 같은 토끼 및 원숭이 조직 혼합 제제와 같은 일부 2차 조직 트롬보플라스틴 참조 제품도 발표했습니다.

(2) 복합조직트롬보플라스틴 국제표준품 : 조직추출물과 생리식염수현탁액에 피브리노겐, 제V인자, 염화칼슘 등을 적당량 첨가한 제제로 소조직 트롬보플라스틴 등 OBT/79 등

현재 전 세계 국가에서는 자국이나 지역에서 제조 또는 생산된 조직 트롬보플라스틴 표준물질을 보정하기 위해 이러한 WHO 표준물질을 널리 사용하고 있습니다. 이로 인해 전 세계적으로 다양한 조직 트롬보플라스틴 참고 제품이 출시되었습니다.

2. 조직 트롬보플라스틴 작업 제제(WP)의 국제 민감도 지수(ISI)

조직 트롬보플라스틴이 응고 인자에 미치는 영향이 다르기 때문에 민감도는 다양합니다. 서로 다른 민감도를 가진 조직 트롬보플라스틴이 PT 검출에서 동일한 결과를 얻기 위해서는 고유한 민감도 지수가 개발되어야 합니다. 이를 위해서는 홈메이드 시약을 국제표준품(IRP)과 비교한 후 보정값을 얻어야 합니다. 구체적인 방법은 다음과 같습니다:

(1) 국제 참조 제품(IRP)을 사용하여 국가, 지역 또는 실험실 참조 준비(참조 준비, RP)를 보정합니다.

(2) 실험실 참조 준비(RP)를 사용하여 작업 준비(WP)를 보정합니다.

1) 검체 : 6주 동안 경구용 항응고제를 복용한 정상인 혈장 2개와 환자 혈장 6개를 연속 10일간 채취하여 총 60개의 검체를 채취하였다.

2) 측정: 측정은 일정한 순서로 진행되며, 각 샘플은 2회 측정됩니다. 로그 그래프 용지에 PT 측정 결과(초)를 가리키고 가로축은 WP의 PT 측정 결과를 나타내고 세로축은 RP의 PT 측정 결과를 나타내며 교정 곡선을 얻습니다. , WP/RP 비율 또는 회귀 방정식을 통해 기울기 b를 찾습니다.

3) WP의 ISI 값 계산: ISI 값이 1.0에 가까울수록 조직 트롬보플라스틴 시약의 민감도가 높아집니다. 따라서 조직 트롬보플라스틴 시약을 생산 및 판매하는 제조업체는 제품에 ISI를 표시해야 합니다. .

3. PT 측정 결과 보고 방법: 이론적으로는 어떤 종류의 조직 트롬보플라스틴이라도 ISI 표시가 되어 있으면 국제 표준품과 비교, 보정이 가능하다. 동일한 측정 단위로 보고됩니다. 1985년 ICSH와 ICTH는 경구용 항응고제의 PT 모니터링 보고 방법을 국제 표준화 비율(INR)로 권장했습니다.

INR 계산 공식은 다음과 같습니다. INR을 사용한 후 민감도가 다른 다양한 조직 트롬보플라스틴이 동일한 INR 값을 얻을 수 있습니다.

4. 기기별 ISI: 위의 PT는 보고 방식에 따른 PT의 수동 방식(시험관 기울이기 방식) 측정에 적합합니다. 그러나 PT의 INR을 결정하는 데 있어 수동 방법과 도구 방법, 도구 방법과 도구 방법 간에는 여전히 차이가 있습니다. 연구에 따르면 ISI가 1.12인 동일한 Thromborel S 시약을 사용하는 세 가지 자동화 기기인 ACL, Cobas Fibro 및 Coaga-Pet에서 평균 PT 값은 각각 10.7초, 12.1초 및 11.1초였습니다. 그러나 동일한 ISI 값을 사용하여 INR을 계산하면 결과 값도 정도에 따라 달라집니다. 이러한 이유로 전문가들은 동일한 조직 트롬보플라스틴 시약이 다른 기기에 사용될 때 소위 "기기 특정 ISI"(기기 특정 ISI) 또는 지역 ISI(로컬 ISI)를 사용하여 INR을 계산할 수 있다고 제안했습니다. 각 기기에 사용되는 트롬보플라스틴 시약은 특정 ISI 값을 가지고 있어야 합니다. ISI 값을 재보정하는 방법은 INR이 표시된 동결건조 혈장을 구입한 후, 본인의 기기에 사용되는 트롬보플라스틴 시약의 ISI 값을 재보정하는 것입니다. 환자의 INR을 비교할 수 있습니다.

(2) 프로트롬빈 시간(PT)의 권장 방법

[원리]

조직 트롬보플라스틴(주로 조직인자와 지질을 함유)과 칼슘 이온은 구연산염 항응고 혈장에 첨가하여 37°C에서 배양한 후 혈장 응고 시간을 측정하는데, 이것이 PT입니다. PT는 주로 요인 VII, II, V, X 및 외인성 응고 시스템의 관련 요인의 억제제를 선별하고 검출하는 데 사용됩니다.

[검체 채취 및 처리]

1. 검체 채취 : 실리콘 또는 플라스틱 주사기를 이용하여 공복 정맥혈을 채취하고, 0.109mol/L를 함유한 유자를 9의 비율로 첨가한다. :1 나트륨산항응고제를 실리콘 또는 플라스틱 시험관에 넣고 가볍게 섞습니다.

2. 검체 처리 : 2000~2500g에서 15분간 원심분리하여 혈소판이 부족한 혈장을 분리하고, 24시간 이내에 검사를 완료합니다.

3. 정상대조혈장 : 18~45세의 정상적이고 건강한 남녀 10명 이상을 선발한다. 단, 임신, 월경 중, 수유 중인 여성, 경구 피임약을 복용 중인 여성은 사용할 수 없습니다. 수집된 혈장은 동결건조하거나 -80°C에서 보관해야 합니다.

[시약]

1. 항응고제: 109mmol/L 구연산나트륨 용액(수정수 두 분자를 함유한 32g/L 구연산나트륨에 해당).

2. 트롬보플라스틴 시약: 시중에서 판매되는 제품에는 ISI, 배치 번호 및 유효 기간이 표시되어야 합니다. 동결건조된 제품은 지침에 따라 지정된 완충 희석제를 추가하여 재구성해야 합니다.

3. 염화칼슘(CaCl2) 용액: 25mmol/L. (현재 일부 시판 시약에는 트롬보플라스틴 용액과 염화칼슘 용액이 혼합되어 있어 추가로 CaCl2 용액을 준비할 필요가 없습니다.)

4. 품질관리 물질: 정상 및 비정상 대조 혈장

5. 시약 제조에 사용되는 물은 순수 1급 기준을 충족해야 합니다.

[악기]

1. 수동 방법: 스톱워치, 항온 수조 또는 전기 가열 블록을 37℃±1℃로 유지합니다. 수심은 시험관을 3cm 이상 담글 수 있으며, 10×mm 면봉관은 표면에 흠집이 없습니다. 표준 0.1mL 피펫. 수정된 스톱워치.

2. 기기 방법: 지침에 따라 다양한 자동 또는 반자동 응고 측정기를 작동합니다.

[조작순서]

1. 수동방식

(1) 측정온도는 36.5~38.5℃이다. 이 온도까지 예열되지만 트롬보플라스틴 시약의 예열은 30분을 초과해서는 안 되며, 혈장의 예열은 일반적으로 10분을 초과하면 안 됩니다.

(2) 플라즈마와 접촉하는 모든 시험관, 시료 주입기 및 기타 장비는 플라스틱 또는 실리콘 처리된 유리관입니다.

(3) 구연산 항응고제 혈장 0.1mL를 취하여 작은 시험관에 추가합니다. 트롬보플라스틴 시약 0.1mL를 추가하고 잘 섞은 다음 37°C 수조에 넣습니다. 그런 다음 25mmol/L CaCl2 용액 0.1mL를 추가합니다(동량의 트롬보플라스틴 시약과 CaCl2 용액을 먼저 혼합하고 0.2mL를 추가할 수도 있음). 즉시 혼합하고 스톱워치를 시작하십시오. 시험관이 여전히 수조에 잠겨 있으면 약 10초 동안 수조에서 꺼내어 시험관 외부의 물방울을 거즈로 계속 기울여 닦아냅니다. 밝은 곳에 튜브를 놓고 흐르는 상태에서 누출이 있는지 관찰하십시오. 피브린이 보이면(액체 흐름이 느려지므로) 즉시 시계를 멈추고 시간을 기록하십시오. 매번 두 개의 튜브를 측정하고 평균으로 보고합니다. 이 시험에서 최종 혼합물의 pH는 7.2~7.3이어야 합니다. 대부분의 상업용 트롬보플라스틴 시약은 완충액 함유 용액으로 준비됩니다.

(4) 각 배치별로 정상 및 비정상 관리를 동시에 실시해야 하며 방법은 시험편과 정확히 동일해야 한다.

[보고 방법]

1. PT의 초(S) 단위로 보고(가장 가까운 0.5초)

2. 환자 혈장에서 보고 /정상 대조군 PT(S) 비율(PRT)이 보고됩니다.

3. 경구 와파린 항응고제 치료를 모니터링할 때 국제표준화비율(INR)을 보고해야 합니다. 대부분의 자동화 기기는 트롬보플라스틴 시약의 측정된 PTR 및 ISI를 기반으로 INR을 자동으로 계산할 수 있습니다. 수동 방법은 다음 공식에 따라 계산기를 사용하여 직접 계산할 수 있습니다.

Poller는 간단한 노모그램을 설계했습니다. PTR 및 ISI 값을 얻은 후 그래프에서 INR 값을 직접 찾을 수 있습니다. 매우 편리하며 중국에도 도입되었습니다.

ICSH 규정에서는 더 이상 희석 곡선이나 백분율(활동) 보고를 사용하지 않습니다.

[기준값]

기기/시약의 종류에 따라 결과가 다르기 때문에 기준값을 일률적으로 규정하기는 어렵습니다.

각 실험실은 건강한 사람 그룹을 독립적으로 측정하고 자체 장비, 시약 및 기타 조건을 기반으로 참조 값을 설정해야 합니다. 그 후에는 최소한 1년에 한 번 또는 조건이 변경되면 새로운 조건에 따라 재설정되어야 합니다. 기준값 PT 측정을 위한 모든 조건은 환자의 혈장 PT 측정 조건(채혈, 용기, 항응고제 등 포함)과 동일해야 합니다. 건강한 헌혈자는 18~55세 남성과 임신 또는 월경 중이 아닌 여성 중에서 최소 20명을 선정해야 하며, 개인차를 줄이기 위해 약을 복용하지 않고 차분하고 안정한 상태에서 채혈해야 합니다. 사람과 어린이는 별도로 통계를 테스트할 수 있습니다. 동시에, 채혈과 측정을 며칠씩 분리하여 일상적인 차이를 줄여야 합니다. 측정 결과는 통계적으로 처리되고 표준 편차가 계산됩니다. 2개의 표준 편차(2SD) 또는 95 신뢰 한계가 참조 범위로 사용됩니다. 세 가지 표준편차가 정상인지 비정상인지는 구체적인 상황에 따라 평가해야 합니다. 통계적으로 볼 때, 이들 중 일부는 정상입니다. 위의 기준을 사용하면 환자(PT 이상)를 놓치는 경우가 거의 없습니다.

3. 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(APTT)의 표준화

(1) 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(APTT)의 표준화

APTT는 검출을 위한 선별 검사입니다. 내인성 응고 시스템의 응고 인자 결함 및 관련 억제제도 현재 응고 인자, 헤파린 항응고 요법 및 루푸스 항응고 물질을 검출하는 주요 수단입니다.

PT 분석과 마찬가지로 부분 트롬보플라스틴, 활성화제, 활성화 시간이 다르면 다양한 응고인자 결핍증, 헤파린, 루푸스항응고제에 대한 민감도가 매우 다릅니다. 예를 들어, APTT 검출용 시약에 사용되는 다양한 활성화제(카올린, 규조토, 엘라그산)는 헤파린, 루푸스 항응고 물질, 인자 VIII 및 IX를 검출하는 데 서로 다른 민감도를 갖습니다.

지금까지 ICSH와 ICTH는 APTT 검출 방법이나 시약을 표준화하기 위한 실행 가능한 계획을 아직 마련하지 못했습니다. NCCLS만이 1992년에 H29-T라는 임시 계획을 제안했습니다.

(2) 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(APTT) 권장 방법

[원리]

혈장에 인지질 및 활성화제 첨가 배양 후 적절한 농도 첨가 칼슘 이온의. 섬유소 응고가 형성되는 시간(초)이 APTT입니다. 이 방법은 주로 인자 VII, XI, VIII, IX, 칼리크레인(PK), 고분자량 키니노겐(HMWK) 및 피브리노겐과 같은 내인성 경로 응고 인자의 결함을 선별하고 결정하는 데 사용됩니다. 이는 또한 위 인자의 억제제 결정, 헤파린 치료 모니터링 및 루푸스항응고인자 검사에도 사용됩니다.

[기기]

이 실험에 사용된 기기 및 장비(채혈, 혈액 저장 용기, 샘플링 장치 및 검체 처리 등 포함) 및 요구 사항은 완전히 동일합니다. PT로. PT에서 사용되는 자동화 기기도 이 실험에 적합합니다.

[시약]

1. 부분 트롬보플라스틴 시약: 상용 제품으로 공급됩니다. 일반적으로 일반적으로 사용되는 활성화제는 활성화제와 함께 비율에 따라(또는 별도로) 제조됩니다. 일반적으로 사용되는 활성화제는 규조토(상품명: Celite), 백토, 실리카 입자, 탄닌산(엘라그산) 또는 기타 사용 가능한 활성화제입니다. 공장에서 제공하는 에이전트입니다.

APTT 시약/기기 조합은 인자 VIII, IX 또는 XI 활성이 0.3μ/mL(또는 <30) 미만인 혈장에서 비정상적으로 장기간 결과를 생성할 수 있어야 합니다.

2. 염화칼슘 용액(25mmol/L) 및 기타 시약은 PT에서 사용하는 것과 동일하다.

[작업 단계]

1. 시료의 채취, 보관, 운송은 PT 측정과 동일합니다. 혈액을 수집하고 보관하려면 깨끗한 플라스틱 또는 실리콘 처리된 유리 혈액 수집 장치를 사용해야 합니다.

2. 검체(혈소판 결핍 혈장)의 준비는 PT와 동일합니다. 분석에는 혈소판이 고갈된 혈장을 사용해야 합니다.

3. 수조나 전열판의 온도는 37℃±1℃ 입니다.

4. 접촉 활성화 시간: 인자 XII를 활성화하기 위해 활성화제를 추가하는 시간은 각 기기 및 시약 제조업체의 규정이 다를 수 있으므로 지침을 엄격히 따라야 합니다. 수동으로 작동할 때는 스톱워치나 유사한 시간 측정 장치를 사용하십시오.

5. 작동: 미리 예열된(30분 이내) APTT 시약 한 부분과 미리 예열된(10분 이내) 테스트 혈장 한 부분을 혼합하고, 다음이 될 때까지 즉시 스톱워치를 시작합니다. 지정된 접촉 활성화 시간이 끝나면 미리 37°C로 예열된 CaCl2 용액 일부를 추가하고 잘 섞은 다음 동시에 스톱워치를 시작합니다. 혈장 응고가 발생하면 시계를 멈추고 혈장 응고 시간(초)을 기록하십시오. 수동 측정 중에는 두 개의 튜브를 동시에 측정하고 평균값으로 보고해야 합니다. 정밀도가 크게 향상된 일부 자동 또는 반자동 응고계는 적절한 품질 관리 표준이 있는 경우 한 번만 측정할 수 있습니다. 정상 및 비정상 대조 혈장을 동시에 측정해야 합니다.

[참고값] PT 참조

[특별 설명]

1. 헤파린 민감도: APTT는 일반적으로 환자의 헤파린 치료를 모니터링하는 데 사용됩니다. 정상 혈장 APTT에 대한 APTT의 비율은 치료 조절 범위로서 1.5~2.5입니다. 그러나 시약/기기 시스템에 따라 헤파린에 대한 민감도가 다릅니다. 헤파린에 대한 시약/기기 시스템의 민감도를 확인할 수 있습니다. 시험관 내 민감도는 APTT를 측정하기 위해 임상적으로 사용되는 것과 동일한 유형의 헤파린을 치료 농도로 정상 혈장에 첨가하는 것을 의미합니다. 시험관 내 민감도는 생체 내 민감도와 동일하지 않지만 참고 자료로 사용할 수 있습니다.

2. 루푸스항응고인자: 루푸스항응고인자는 인지질에 대한 자가항체이므로 혈액응고의 중요한 구성요소인 인지질에 저항하므로 응고를 방해할 수 있습니다. 루푸스항응고인자가 혈액에 존재하는 경우 APTT는 연장됩니다. 그러나 루푸스항응고인자에 대한 APTT 시약의 민감도는 시약 제조업체가 충분한 지침을 제공해야 하며 관련 국가 기관에서도 루푸스항응고인자에 대한 정보를 제공할 수 있습니다. 그러나 환자마다 매우 다양하며 단일 시약으로 모든 루푸스항응고인자를 측정할 수는 없습니다.

IV. 피브리노겐 측정(Fg)의 표준화

(1) 피브리노겐 측정(Fg)의 표준화

피브리노겐(Fg))은 간에서 합성됩니다. 혈장과 체액에 존재하며 그 구조와 기능은 기본적으로 이해되었으나 아직까지 문헌에 보고된 이상적인 임상적 검출 방법이 없으며 일부는 정밀도와 정확도가 상대적으로 낮습니다. 그러나 너무 복잡하고 번거롭습니다. 일부는 간단하고 빠르지만 정밀도와 정확성이 낮습니다.

1992년 영국 국립 생물 표준 관리 연구소(NIBSC)는 번호 89/644의 피브리노겐 표준 제품에 대한 연구를 완료하고 이를 WHO 생물학적 표준 전문가 위원회(ECBS)에 권장했습니다. [15] ECBC가 국제참조제품(IRP)으로 승인했습니다. 이후 모든 국가에서는 자국이나 제조사에서 생산하는 기준 이하의 규격을 표준화하기 위해 이 규격을 도입하게 되었다(우리나라 보건부 임상시험센터에서도 도입한 바 있다). 이는 피브리노겐 측정의 표준화를 향한 중요한 단계를 밟았습니다. 따라서 조사에 따르면 각 표준품의 피브리노겐 함량은 크게 다릅니다.

(2) 피브리노겐(Fg) 측정을 위한 권장 방법

각 가족이 IRP를 사용하여 자체 표준을 표준화하는 경우 Jacobsson의 개선된 방법을 사용하는 것이 좋습니다. 이제 다음과 같이 소개됩니다.

[시약]

1. 완충액: Na2O·2H2O 0.882g, KH2PO4 2.77gl, 이는 저장 완충액의 1부분을 식염수 2개에 추가합니다. pH 6.35의 응용 완충액.

2. 일반 식염수: 0.15mol/L

3. 인간 또는 소 트롬빈: 500IU/mL, 일반 식염수 용액.

4. 혈전 용해제: 요소 400g을 소량의 증류수, 1.0mol/L NaOH 200mL에 녹이고 물을 1리터에 첨가합니다.

[조작단계]

피브리노겐 동결건조(표준)제품(89/644 유래)을 증류수 1mL로 재구성하고, 2mL가 함유된 유기용액에 첨가한다. 적용 완충액 50μL를 얕은 유리 접시나 기타 용기에 넣고 빠르게 혼합한 후 실온에서 2시간 동안 방치합니다.

흡수성 천(흡수성을 그 아래에 놓을 수 있음) 위에 용기를 거꾸로 놓은 다음 적절한 물질(여과지 포함)을 사용하여 혈전을 흡수합니다. 혈전을 제거하고 생리식염수 50mL로 2회 세척한다. 1회 세척 후 혈전을 흡입하여 건조시키고(유리를 사용하여 혈전을 짜낼 수 있음) 혈전에 함유된 액체를 최대한 제거해야 한다. 액체의 오염을 피하십시오. 다른 혈장 단백질은 남아 있습니다. 필요한 경우 깨끗한 면 천을 짜내십시오.

혈전용해제 7.5mL가 담긴 용기에 혈전을 조심스럽게 넣고 혈전이 완전히 녹을 때까지 잘 흔들어주세요. 빛의 경로가 1cm인 큐벳에 붓고 혈전용해제를 공백으로 하여 280nm, 315nm 파장에서 흡광도(A)를 읽는다.

(3) 적용 가능한 피브리노겐(Fg) 측정(Clauss 방법)

[원리]

혈장에 트롬빈을 첨가하여 섬유질 단백질원을 피브린으로 변화시키고, 응고는 혈장에서 발생합니다. 트롬빈의 양이 충분하면 서로 다른 피브리노겐 함량과 반응하며 혈장 응고가 일어나는 시간은 피브리노겐 함량에 반비례합니다.

[시약]

1. 소 트롬빈 100NIHU/mL

2. 피브리노겐 표준물질(IRP 2차 표준물질)

3. (다음 두 가지 중 하나 선택):

(1) 바르비투르산염 완충액(PH7.5); 바르비투르산염 2.5g, 바르비투르산염 나트륨 2.75g, 탈이온수 750mL에 Lu 염화나트륨 7.3g을 녹이고 보정합니다. pH를 7.5로 맞추고 물을 1L에 첨가합니다.

(2) 이미다졸(또는 글리옥살린) 완충액: 이미다졸(0.05mol/L) 3.4g, 염화나트륨 5.85g, 물 약 500mL에 0.1mol/L 염산 186mL를 첨가하고 조정합니다. pH를 7.3-7.4로 맞추고 마지막으로 증류수를 1리터에 추가합니다.

[조작 단계]

1. 수동 방법

(1) 위의 완충액을 사용하여 표준품을 0.8, 1.6, 2.4, 4.0g으로 희석합니다. /L 피브리노겐 농도, 각 농도를 완충액으로 1:10으로 희석했습니다.

(2) 환자 혈장과 정도 관리 물질은 완충액으로 1:10으로 희석됩니다.

(3) 100 NIHU/mL와 소 트롬빈이 함유된 용액을 혼합하여 실온에 보관합니다. 기기 방법으로 측정하는 경우 희석 없이 100 NIHU/mL, 소 트롬빈을 사용하십시오.

(4) 시험관에 희석 혈장 0.2mL를 넣고 37°C 수조에 4분간 담가둔다.

(5) 37°C로 예열된 1OONIHU/mL 트롬빈 용액 0.2mL를 첨가하고 잘 흔들어 준 후 즉시 스톱워치를 시작하여 응고 시간을 지속적으로 관찰합니다. 응고가 발생하면 시계를 중지하십시오.

(6) 각 표본을 두 번 측정하고 평균을 계산합니다. 각 표준관과 대조(정도관리)관을 동일한 방법으로 동시에 측정하여 시간을 정확하게 기록한다.

(7) 계산: 로그 종이를 사용하여 응고 시간을 세로축으로 하고 피브리노겐 농도를 가로축으로 하여 각 해당 농도의 표준 튜브를 응고 시간과 연결하여 그래프를 그립니다. 그래프에서 해당 점을 표시하고 직선으로 연결하여 표준 곡선을 만듭니다. 그런 다음 환자 혈장과 대조 혈장을 기준으로 응고 시간을 측정했습니다. 차트에서 피브리노겐 함량을 찾으세요.

혈장 피브리노겐 함량이 4g/L를 초과하는 경우 혈장을 희석하여 다시 검사해야 하며 그 결과에 희석 배수를 곱해야 합니다. 혈장 피브리노겐 함량이 0.8g/L 미만인 경우에는 원혈장을 1:2 또는 1:5로 희석하여 그 결과를 표준곡선에서 확인한 후 5 또는 2로 나누어 측정합니다.

2. 도구적 방법: 이 방법은 자동 또는 반자동 응고계를 사용하여 트롬빈 시간(TT)으로 측정할 수 있습니다. 결과는 자동으로 인쇄될 수 있습니다. 일반적으로 기기 방법은 수동 방법보다 더 정확합니다.