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hnrnpk 유전자 과발현 마우스 구축 방법

목적: 대장균 β-갈락타제 유전자 LacZ를 리포터 유전자로 사용하여 Tyro3 및 Axl 수용체 티로신 키나아제에 loxp 부위를 포함하는 형질전환 쥐를 확립하고 조직 특이성이 다른 Cre 쥐와 교배하여 형질전환 쥐를 얻습니다. Tyro3 및 Axl을 시공간적으로 발현하여 다양한 조직에서 이들의 기능을 연구하기 위한 기반을 마련했습니다. 방법 loxp 부위를 포함하는 Tyro3 및 Axl 수용체 티로신 키나제 플라스미드를 제작하고 정확한 서열 분석 후 Geo-STOP-msAxl을 삽입하는 형질전환 벡터를 제작했습니다. CAG 프로모터 하류의 Geo-STOP-msTyro3 유전자를 주입법으로 BDF1 기증자 마우스의 수정란에 주입하고, 수정란을 ICR 수용자 마우스에 이식한 후, 이중 프라이머 PCR을 수행하였다. F0 및 Fn 세대 마우스의 유전자형을 확인하였고, 마우스 조직 내 LacZ 유전자를 관찰하기 위해 RT-PCR 및 X-gal 염색을 이용하였고, 타겟 발현의 차이를 검출하기 위해 WB(Western Blot)를 이용하였다. 결과 형질전환 마우스 및 야생형 마우스에서 LacZ 유전자의 존재를 얻었으며, LacZ를 사용한 마우스에서 X-gal 염색을 수행하여 양성 마우스를 확인했습니다. 그 결과 Geo-STOP-msTyro3 Blue의 뇌, 고환, 흉선에서 Geo-STOP-msAxl의 뇌, 심장, 신장에서 침전물이 관찰되는 것으로 나타났으며, 이는 표적 유전자가 존재하는 조직 및 기관을 간접적으로 나타냅니다. 이중 양성 Geo-STOP-msTyro3, ​​Geo-STOP -msAxl 형질전환 마우스 및 야생형 마우스에 대해 WB 테스트를 통해 Tyro3 및 Axl 유전자의 발현에 차이가 없음이 확인되었습니다. 정지 서열을 추가하면 Tyro3 유전자가 존재하고 그 발현이 억제됩니다. 결론 Geo-STOP-msAxl 및 Geo -STOP-msTyro3 티로신 수용체 형질전환 쥐.