제목: FRET 방법을 사용하여 Mps1 단백질과 상호작용하는 CENP-E 단백질 도메인 연구

저자: Liu Zijie, Weng Yaguang, Li Suyan, Shi Qiong, Cai Yan, Liu Bin, Zhang Yanyanchen

기관: 충칭 의과대학 의학검사의학과, 교육부 핵심 실험실, 충칭 시 핵심 실험실, 충칭 400016 임상 검사실 진단

출판물 이름: "중국 생명공학 저널" 2009년 29권 4호, 28-34페이지

키워드 CENP-E Mps1 단백질 상호 작용 형광 진동 에너지 전달

추상 목적: Mps1 단백질과 상호 작용하는 CENP-E 단백질 도메인. 방법: 재조합 플라스미드 pEGFP-CENPE2(아미노산 674~1085) 및 pEGFP-CENPE3(아미노산 1200~2134)를 인간 배아 신장 293(HEK293) 세포에 형질감염시키고 수용체 표백 형광을 사용했습니다. EGFP-CENPE2, EGFP-CENPE3 및 Mps1 사이의 에너지 전달 속도(Ef)를 검출하기 위해 방법(FRET 방법)을 사용하였고, 추가로 면역형광 침전 방법을 사용하여 FRET 실험 결과를 검증하였다. 결과: 재조합 플라스미드를 HEK293 세포에 형질감염시킨 후, 재조합 플라스미드와 Mps1에 의해 발현된 융합 단백질이 레이저 초점 현미경으로 관찰되었으며 FRET 검출 결과는 EGFP-CENPE3 및

Mps1 사이의 에너지 전달률은 [(12.63±0.48)%, n=30]이고, pEGFP-CENPE2와 Mps1 사이의 에너지 전달률은

[(3.07±0.21)%, n=30], 비교 대조군[(2.96±0.27)%, n=30]에서는 pEGFP-CENPE3과 Mps1 사이의 에너지 전달 속도의 차이가 유의미하며(p<0.05), 면역면역침강 실험 결과 EGFP-CENPE3 사이에 상호작용이 있는 것으로 나타났습니다. 그리고 Mps1 단백질. 결론: FRET 기술과 면역침강 실험을 통해 EGFP-CENPE3과 Mps1 사이에 상호작용이 있음이 입증되었습니다.