1. 검사 목표 결정: 검출될 병원균의 종류와 유전자 조각을 식별하고, 생물학적 특성과 게놈 서열을 이해하고, 검사 대상 유전자 조각을 확인한다.
2. 디자인 유인물: 목적 유전자 단편의 순서에 따라 생물정보학 소프트웨어를 이용하여 특이성 유인물을 설계한다. 유인물은 특이성, 민감성, 안정성이 높아야 하며, 목적 유전자 조각을 효과적으로 증폭시켜 비특이적 증폭을 피할 수 있어야 한다.
3. 표준품 구축: 목적유전자 단편의 순서에 따라 표준품을 합성해 농도 그라데이션을 희석시켜 표준곡선으로 만든다.
4. 반응 조건 필터링 및 최적화: 설계된 프라이머와 기준에 따라 반응 온도, 반응 시간, 프라이머 농도, Mg2+ 농도 등을 포함한 반응 조건을 필터링하고 최적화합니다.
5. 테스트 키트 검증: 알려진 농도의 표준품을 사용하여 테스트 키트 정확성 및 반복성을 확인하기 위한 검증 실험을 수행합니다. 동시에, 다른 병원미생물을 검출할 수 있는지 확인하기 위해 테스트 키트 교차 검증이 필요하다.